【摘 要】
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目的:本研究以中国荷斯坦公犊牛为试验动物,研究复合益生菌对大肠杆菌K99致犊牛腹泻的小肠组织结构的影响以及肠胶质细胞（EGCs）分泌因子GSNO、Sox10的分布表达及含量的影响。腹泻是导致犊牛死亡的主要原因,严重影响了养牛业的发展,而抗生素被禁用,因此,其替代品复合益生菌被应用于防治动物腹泻,可以抑制犊牛腹泻的发生。EGCs在肠黏膜保护中具有重要作用。本试验探究复合益生菌对犊牛腹泻小肠黏膜形态和
【基金项目】
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第八师现代农业科技攻关与成果转化项目（NO.2018NY05）；
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目的:本研究以中国荷斯坦公犊牛为试验动物,研究复合益生菌对大肠杆菌K99致犊牛腹泻的小肠组织结构的影响以及肠胶质细胞（EGCs）分泌因子GSNO、Sox10的分布表达及含量的影响。腹泻是导致犊牛死亡的主要原因,严重影响了养牛业的发展,而抗生素被禁用,因此,其替代品复合益生菌被应用于防治动物腹泻,可以抑制犊牛腹泻的发生。EGCs在肠黏膜保护中具有重要作用。本试验探究复合益生菌对犊牛腹泻小肠黏膜形态和EGCs分泌GSNO、Sox10的影响,以期为犊牛腹泻的防控提供参考依据。方法:选择体况相似的健康5日龄荷斯坦公犊牛24头,体重约为40kg。自犊牛出生后饲喂足量的初乳及鲜乳。将犊牛随机分为3组,常规饲养管理,对照组每头每日灌服10m L生理盐水;益生菌组在试验第一天饲喂含菌量为1×109CFU/m L的大肠杆菌K99 10m L,之后每天饲喂复合益生菌3g,复合益生菌由嗜酸乳杆菌（S1）、枯草芽孢杆菌（K1）、布拉迪酵母菌（B1）组成,比例为1:1:3,含菌量为1×109CFU/m L;感染组每头每天灌服大肠杆菌K99 10m L,直至犊牛发生腹泻。于7d、14d、21d分别随机挑选2头犊牛宰杀并取组织样,在试验期到之时,于次日清晨晨饲前宰杀。取小肠组织进行HE染色及免疫组化,并将小肠均浆取上清进行ELISA检测。结果:1.利用石蜡切片HE染色,观察犊牛小肠各段组织病理学变化。对照组犊牛十二指肠、空肠及回肠肠绒毛完整;而益生菌组小肠各段组织结构也较完整,无绒毛断裂、脱落现象,并且肠绒毛高度增加,空肠的益生菌组肠绒毛显著高于对照组（P<0.05）;感染组小肠绒毛有明显的绒毛断裂,脱落现象,十二指肠与空肠肠绒毛高度低于对照组（P<0.05）,十二指肠、空肠、回肠肠绒毛高度均低于益生菌组（P<0.05）。2.利用ELISA方法检测犊牛EGC分泌因子GSNO、Sox10的含量,GSNO结果为,三组的十二指肠中的GSNO的含量无显著差异（P>0.05）;空肠中益生菌组含量高于对照组（P>0.05）,感染组含量低于对照组（P<0.05）,益生菌组含量高于感染组（P<0.05）;在回肠中,益生菌组含量高于对照组（P>0.05）,感染组含量低于对照组（P<0.01）,益生菌组含量高于感染组（P<0.01）。益生菌组Sox10含量高于对照组（P<0.05）;在空肠,益生菌组Sox10含量高于感染组（P<0.05）,对照组含量高于感染组（P>0.05）;在回肠益生菌组含量高于对照组（P<0.05）,感染组含量低于对照组（P<0.05）。3.利用免疫组化的方法观察犊牛EGC分泌因子GSNO、Sox10的分布情况,其中GSNO及Sox10在对照组犊牛小肠中主要表达于肠绒毛固有层、小肠腺、黏膜上皮;益生菌组主要表达于肠绒毛固有层、小肠腺、黏膜上皮、黏膜下层及血管周围;感染组主要表达于黏膜上皮、肠绒毛固有层。并且益生菌组强表达,对照组表达,感染组弱表达。结论:大肠杆菌K99可以对小肠结构造成损伤,从而造成哺乳期犊牛发生腹泻,复合益生菌可以在一定程度上保护肠道粘膜,进而增强肠道屏障功能。大肠杆菌K99可导致小肠胶质细胞分泌因子GSNO、Sox10的分泌降低;复合益生菌可对肠道屏障起到一定的保护作用,提高GSNO、Sox10的分泌。
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