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经济的发展,人民的物质文化需求也日益增长。尤其对食品的需求从吃饱过渡到要求品质,这增加了对安全有效的食品添加剂的需求。蛋白质经水解游离出小肽及氨基酸片段,使其热稳定性、溶解性及营养性都得到明显提高,是当今食品加工市场的重要原料。氨肽酶是一种可以有效切除蛋白末端氨基酸残基的外肽酶,从而可以脱除蛋白水解液的苦味。因此,对氨肽酶进行研究,将对整个食品加工行业及人们的高品质生活发挥重要意义。本论文旨在利用两个不同的表达载体,分别转化三个不同的表达宿主,探究最适合亮氨酸氨肽酶异源表达的载体与宿主。本论文通过比对蜡状芽孢杆菌CZ的16SrRNA,设计引物扩增出了其亮氨酸氨肽酶全长基因CZ-lap,成功构建了重组克隆载体pMD18-T-LAP和两个重组表达载体pEASY-E2-LAP及pET22b-LAP,成功获得五株重组表达菌株pEASY-E2-LAP-BL21(pEASY-B)、pEASY-E2-LAP-OrigamiTM(pEASY-O)、pEASY-E2-LAP-Rosetta(pEASY-R)和pET22b-LAP-BL21(pET22b-B)、pET22b-LAPOrigamiTM(pET22b-O),其中pEASY-O、pET22b-B及pET22b-O三株表达菌株异源表达并检测到酶活。因氨肽酶是金属酶,故对其进行了金属离子激活作用研究,结果表明0.5 mM的Ni2+对pEASY-O菌株的激活作用最好,高达14.5倍。又对该菌株进行了表达条件优化的初步研究,结果表明,在菌体OD为1.0-1.2之间加入IPTG诱导表达,在28℃诱导4 h,表达效果最好,酶活可达22.40 U/mL。最后,为了探索蜡状芽孢杆菌CZ中含有几种亮氨酸氨肽酶,对其进行了分离纯化。分别使用硫酸铵沉淀、Sephadex G50凝胶层析进行了初步纯化,利用HiTrapCapto DEAE阴离子交换层析和Phenyl Fast Flow进行了中度纯化,利用Phenyl HP疏水层析进行了精细纯化。每一步之后的SDS-PAGE蛋白胶都清晰看到蛋白总条带的减少。最终亮氨酸氨肽酶的纯化度达到93.56倍。