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黄曲霉毒素(AF)是毒性最强的一种天然毒素,易发生于温暖和潮湿地区,主要污染谷物及其他食品。其中,黄曲霉毒素B1(AFB1)是迄今所知最强的致肝癌物质之一,被国际癌症研究机构(IARC)划定为Ⅰ类致癌物。AFB1在肝细胞内代谢活化成具有高致癌活性的8,9-环氧AFB1(AFBO),AFBO能够与DNA分子共价结合形成AFB1-DNA加合物,继而造成各种形式的DNA损伤。彗星实验是检测DNA损伤的简单而敏感的方法,可以在单细胞水平上检测DNA单链和双链损伤、不完全修复位点、碱性不稳定位点和交联。本研究包括三个试验:(1)建立用于雏鸭DNA损伤检测的改良彗星实验方法。雏鸭经AFB1灌胃染毒,2 h后分离其肝细胞和全血细胞,通过改良彗星实验测定DNA损伤。结果显示,AFB1能够导致雏鸭肝细胞DNA损伤,表现为TailDNA%、尾长、尾矩、Olive尾矩等彗星参数的显著增加(P<0.05);所有处理组全血细胞DNA彗星图像几乎全部严重拖尾,无法用于彗星实验分析。试验表明,改良彗星实验能够作为检测AFB1遗传毒性的有力工具,雏鸭全血细胞由于大量有核红细胞的干扰不能作为彗星实验的细胞模型。(2)应用改良彗星实验较为系统的研究AFB1在不同染毒水平下致雏鸭肝细胞DNA损伤发生、加重、恢复的动态过程。96只雄性北京鸭雏鸭,随机分为16组,每组6只。雏鸭AFB1灌胃染毒后,分别于1h,2h,8h,24h和48h用彗星实验检测肝细胞DNA损伤。结果显示,雏鸭对于AFB1导致的肝细胞DNA损伤非常敏感,肝细胞DNA损伤程度与AFB1摄入量以及摄入时间有关。一次染毒2 h左右DNA损伤达到高峰,所有染毒组在Tail DNA%、尾长、尾矩、Olive尾矩等指标上均显著高于对照组(P<0.05);随着AFB1染毒剂量增加,DNA损伤程度加深、持续时间延长。试验表明,一次经口染毒AFB1 2h后雏鸭肝细胞DNA损伤达到高峰,此时DNA损伤程度与AFB1暴露之间的量效关系最为明显。AFB1致雏鸭肝细胞DNA损伤的效应非常强,低剂量(1/100 LD50)AFB1暴露就能够引起雏鸭肝细胞DNA发生显著损伤。试验还提示,雏鸭是研究AFB1遗传毒性的一个良好动物模型,彗星实验能够反映AFB1致雏鸭肝细胞DNA损伤的量效关系。(3)三种典型霉菌毒素吸附剂对AFB1致DNA损伤的缓解作用。试验设两个染毒梯度,即2.5μg AFB1/只和25μg AFB1/只,按照1 ml AFB1溶液添加30mg吸附剂的比例将AFB1溶液分别与3种吸附剂混合,经口灌胃雏鸭,2 h后改良彗星实验检测其肝细胞DNA损伤。结果显示:两种浓度AFB1染毒组与对照组相比在Tail DNA%、尾长、尾矩、Olive尾矩等四个彗星参数上均有差异显著(P<0.05),吸附剂具有降低DNA损伤的趋势,吸附剂的这种作用效果因吸附剂种类以及染毒剂量不同而显现出一定差异。结果表明,三种吸附剂A、B、C对于AFB1引起的雏鸭肝细胞DNA损伤具有一定的缓解作用,而且吸附剂B对其干预效果优于吸附剂A和C,后两者效果基本相同;吸附剂在AFB1较低染毒水平下干预效果较好,在较高的AFB1染毒水平下,吸附剂干预效果降低。