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恶性肿瘤是目前危害人类健康的主要疾病之一。在恶性肿瘤的三大疗法中,药物治疗占有重要的地位。从天然产物中筛选具有抗肿瘤活性的药物组分已成为研发抗肿瘤药物的重要途径。MSY-001是存在于姜科植物蓬莪术(Curcuma zedoaria(Berg)Rose)中的一种天然成分。近年来MSY-001的抗肿瘤活性得到研究人员的关注,体外实验表明, MSY-001对Hela、Hep-2、HL-60、PC3、SGC-7901、 HT-1080及U251等几种细胞均有较强的诱导凋亡作用,其抗肿瘤作用远远超过了5-Fu,与顺铂活性基本相当。体内实验表明,MSY-001能抑制小鼠U14、S180肿瘤的生长。鉴于MSY-001抗肿瘤作用的有效性,有必要进行进一步研究。本文主要研究了MSY-001在大鼠体内的代谢情况,并建立了尿液、胆汁和粪便中原型药物与代谢物的LC-MS分析方法,应用于MSY-001在大鼠体内的排泄研究。1.MSY-001在大鼠尿液中的代谢物分析目的研究大鼠口服MSY-001制剂后体内的代谢情况。寻找给药后大鼠尿液中的代谢产物,将其制备纯化并鉴定结构,为MSY-001的体内代谢提供参考,亦为其排泄研究的方法学建立提供对照品。方法通过比较口服MSY-001及空白溶剂的大鼠尿液HPLC色谱图,发现6个差异峰,并采用大孔吸附树脂、制备薄层色谱、制备液相色谱、Sephadex LH-20等分离方法,以及紫外光谱、液质联用、核磁共振等结构鉴定方法,确定了8个代谢产物,并推测体内代谢途径。结果从大鼠口服MSY-001制剂后的尿液中分离纯化获得8个代谢产物,运用UV、MS、NMR等谱图信息确定其结构,其中4个代谢物为全新化合物,分别是：2a-hydroxyl-aeruginolactone (M2),14-hydroxyl-aeruginolactone (M3), aeruginolactone B (M6)和1β,8β-dihydroxyeudesm-4,7(11),-dien-8a,12-olide (M4-1a),另4个为已知化合物,分别是：aeruginolactone (M5),1β,8β-dihydroxyeudesm-4(14),7(11)-dien-8a,12-olide (M4-1b),1β,8β-dihydroxyeudesm-3,7(11),-dien-8α,12-olide (M4-2)和1β,10a,4a,5β-diepoxy-8ahydroxy-glechoman-8a,12-olide (M1),推测MSY-001在大鼠体内先氧化生成M5,再进一步代谢生成其他代谢物。2.大鼠尿液、粪便和胆汁中MSY-001及其代谢物的分析方法的建立目的为MSY-001在大鼠体内的排泄研究建立可靠的方法学。方法以制备的代谢物为对照品,运用LC-MS分析方法,建立了大鼠尿液、粪便及胆汁中原型药物与代谢物测定一共四套方法学。结果。大鼠MSY-001后,尿液中主要以代谢物排泄,粪便中主要以代谢物M5和原型药物排泄,胆汁中主要以代谢物排泄,并有一定量的二相结合产物。在此基础上建立了大鼠尿液、粪便、胆汁中MSY-001及其代谢产物的LC-MS测定方法,结果如下：(1)大鼠尿液中主要检测代谢物排泄,尿液中的内源性杂质不干扰代谢物的测定。尿液中代谢物的绝对回收率在50～95%；方法回收率在93%-108%之间；精密度(RSD)均小于10%；线性范围分别为M1：16.68-1668ng/mL; M2:31.25-3125ng/mL; M3:23.62-2362ng/mL; M4:28.93-2893ng/mL; M5:16.35-1635ng/mL;标准曲线的相关系数r≥0.999；定量下限分别为M1：16.68ng/mL (RSD<5%); M2:31.25ng/mL (RSD<6%); M3:定量下限23.62ng/mL (RSD<5%); M4:28.93ng/mL(RSD<7%); M5:16.35ng/mL (RSD<10%)。稳定性研究结果表明：尿液样品在-80℃冷冻保存3天、20天；反复冻融2次,均符合要求。(2)大鼠粪便中分别检测MSY-001及代谢物M5的排泄,粪便中的内源性杂质不干扰两者测定。粪便中MSY-001的绝对回收率大于60%；方法回收率大于95%；精密度(RSD)均小于10%；线性范围为2-500ng/mg,定量下限为2ng/mg(RSD<5%)。粪便中M5的绝对回收率大于95%；方法回收率大于95%；批内的变异系数小于5%。M5的线性范围为0.4675-116.9ng/mg,定量下限为0.4675ng/mL(RSD<5%)。(3)大鼠胆汁中主要检测代谢物排泄,其中以M4和M5为主。胆汁中的内源性杂质不干扰测定。胆汁中各代谢物的基质效应均在±10%范围内；绝对回收率在75～95%；方法回收率在88%-107%之间；精密度(RSD)均小于10%。M1的线性范围为53.38-3336ng/mL,定量下限为53.38ng/mL(RSD<5%); M2的线性范围为100～6250ng/mL,定量下限为100ng/mL (RSD<5%);M3的线性范围为75.59-4724ng/mL,定量下限为75.59ng/mL (RSD<5%);M4的线性范围为370.3-23143ng/mL,定量下限为370.3ng/mL (RSD<5%);M5的线性范围为209.2-13076ng/mL,定量下限为209.2ng/mL (RSD<5%)。方法学验证均符合要求,可运用于大鼠口服MSY-001制剂的排泄研究。3大鼠口服MSY-001制剂后的排泄研究目的研究MSY-001在大鼠体内的排泄情况,计考察其是否达到质量平衡要求。方法大鼠口服一定剂量的MSY-001制剂后,考察尿液、胆汁和粪便中的排泄情况。通过计算尿液和粪便中原型药物与代谢物的总排泄率确定MSY-001在大鼠体内是否达到质量平衡。结果大鼠单次口服MSY-001后,尿液中主要以代谢物排泄,而几乎无原型药物排泄。粪便中主要以代谢物M5和原型药物排泄。胆汁中主要以代谢物排泄,并有大量的M4和M5为二项结合产物(葡醛酸及硫酸酯结合产物)。给药后96内小时尿液和封粪便中的总排泄率为给药量的41.87±9.3%(n=6)；给药后56小时内胆汁中的总排泄率相当于为给药量的的6.430±±2.5%(n=6)。