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目的:支气管哮喘是呼吸系统最常见和多发的疾病之一,是一种严重影响人类身体健康和生活质量的疾病,目前国外有相关研究表明相对空白组,沉默信息调节蛋白1(SIRT1)在哮喘模型小鼠体内有显著升高,而sirtinol作为SIRT1抑制剂,能降低SIRT1水平,但确切的抑制作用机制尚不清楚。本实验通过研究不同浓度sirtinol对哮喘小鼠体内SIRT1基因的表达及白介素5(IL-5)水平的影响,同时比较各个浓度sirtinol与地塞米松对哮喘的治疗作用,寻找其作用的最佳浓度,从而探索治疗哮喘的新途径。方法:将42只Balb/c雌性小鼠,随机分为哮喘模型组(Asthma组简称As组)(n=6只)、地塞米松干预组(Dm组)(n=6只)、sirtinol干预组(S1,S2,S3组)(n=6*3只)、空白对照组(Blank组简称Bk组)(n=6只)和二甲亚砜对照组(MDSO组简称Md组)(n=6只)。哮喘模型组:每只小鼠于第1天、第8天和第15天腹腔注射0.2ml抗原混悬液(鸡卵清蛋白OVA100ug+氢氧化铝2mg+生理盐水0.2ml)致敏,第16天开始激发,经0.75%戊巴比妥麻醉后,采用鼻腔滴入法,每只小鼠滴入40u12%OVA溶液(即2gOVA+100ml生理盐水)连续7天。地塞米松干预组:致敏同哮喘模型组,在激发前30分钟腹腔注射地塞米松溶液0.2ml(3mg/kg)。sirtinol干预组(S1,S2,S3组):致敏同哮喘模型组,在首次激发前1小时和末次激发后3小时分别腹腔注射sirtinol溶液。S1组腹腔注射sirtinol溶液浓度为0.05mg/kg;S2组:sirtinol溶液浓度为0.5mg/kg;S3组:sirtinol溶液浓度为3.0mg/kg。空白对照组:第1天、第8天和第15天腹腔注射0.2ml生理盐水,第16天开始在0.75%戊巴比妥麻醉后用40ul生理盐水滴鼻,连续7天。二甲亚砜对照组:致敏和腹腔注射时间同sirtinol干预组,腹腔注射为0.125%二甲亚砜(MDSO)溶液作溶剂对照组。于末次激发24小时后处死小鼠,采用HE染色评估小鼠肺组织的一般形态和气道炎性细胞浸润情况,用免疫组织化学检测小鼠肺组织中SIRT1的表达,行实时荧光定量PCR法检测小鼠肺组织中SIRT1和内参基因ACTB的mRNA含量,并用酶联免疫夹心法(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-5的含量。各组数据均用x±s表示,不同组间行单因素方差分析,肺组织中SIRT1表达量和肺泡灌洗液中IL-5量相关性用直线相关分析,用SPSS13.0软件系统处理统计数据,p<0.05表明存在显著差异。结果:(1)肺组织病理组织学HE染色:As组可见小气道及小血管周围有大量的炎性细胞浸润,粘膜及粘膜下层水肿,肺泡腔可见嗜酸性粒细胞、单核细胞及溢出的红细胞,肺泡间隔断裂等。Bk组小气管黏膜无明显水肿,管腔光滑、无闭塞,小气道及小血管周围未见炎性细胞浸润。二甲亚砜对照组炎症渗出明显,可见大量炎性细胞浸润。地塞米松干扰组炎细胞和渗出物较少,炎症有明显的减少。S1组肺泡结构清晰,肺泡腔内及肺泡间质炎性细胞和渗出物减少,有明显的炎症吸收;S2组有部分炎症吸收,但S3有少量炎症吸收。(2)免疫组织化学检测肺组织SIRT1表达:Bk组肺组织气道上皮SIRT1表达呈阴性;As组和Md组SIRT1表达呈强阳性;Dm组表达呈弱阳性;S1,S2,S3肺组织气道上皮SIRT1表达呈表达呈阳性,其中S1组最弱,S3组较强,S2表达在两者之间。(3)探针法荧光定量PCR检测肺组织SIRT1mRNA的表达:①肺组织SIRT1 mRNA在As组和Md组表达量最高,二者之间差异没有显著性(P>0.05),Bk组中最低,其余组均在两者之间;②相对As组,Dm组SIRT1表达水平明显降低(P<0.05);③相对As组,sirtinol干预组SIRT1水平均有所下降,随着sirtinol浓度的增加,其表达水平有所升高,S1组表达水平最低,而S3组最高,S2组居于二者之间,各组之间进行两两比较,存在显著差异(P<0.05);④S1组与Dm组SIRT1表达水平比较,二者差异没有统计学意义(P>0.05),而S2、S3组与Dm组差异有显著性(P<0.05)。(4)肺泡灌洗液中IL-5的含量:Bk组BALF中IL-5含量最低;As组和Md组IL-5含量最高,二者差异不显著(P>0.05);其余组均介于两者之间。相对As组,Dm组IL-5水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);而sirtinol干预组,随着sirtinol浓度的升高,IL-5水平呈升高趋势,S1组最低,S3组最高,而S2组在二者之间,两两比较有显著差异(P<0.05)。Dm组与S1组IL-5水平差异不显著(P>0.05),而S2、S3组与Dm组差异有显著性(P<0.05)。结论:(1)哮喘模型小鼠体内较空白组SIRT1明显升高,而地塞米松可以显著降低哮喘小鼠体内SIRT1水平;(2)sirtinol抑制肺组织中SIRT1和BALF中IL-5表达水平,在低浓度作用明显,随着浓度的升高,抑制作用有所减弱,在哮喘小鼠体内抗炎作用也会有所减弱;(3)地塞米松和低浓度sirtinol在降低哮喘小鼠体内SIRT1的水平的作用上没有显著差异,但后者作用与浓度有关;(4)肺组织中SIRT1表达水平与BLAF中IL-5水平成正相关,所以SIRT1在某种程度上也反应过敏性气道疾病气道炎症的程度。