诱导性多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPSCs)具有多向分化能力,在临床疾病的治疗,药物筛选等方面具有巨大的应用价值。猪,不仅是重要的经济动物,而且是极好的生物模型动物,因此继小鼠和人诱导型多能性干细的建立,猪iPSCs的建立一直是干细胞领域研究的重点。在近年的研究中,猪iPSCs的建系虽然已有报道,但是并没有获得一株真正意义上的猪iPSCs。目前所得的猪iPSCs存在着质量低,细胞系间差异大,特征不一致的问题。同时,关于猪胚胎干细胞的研究进展缓慢,目前为止,尚没有建系的猪胚胎干细胞系。这些问题的存在给猪iPSCs的建立带来了多重阻碍,同时影响了人们对猪iPSCs重编程过程中分子机理的研究。近年研究发现,成纤维细胞在诱导成为iPSCs的过程中会经历一个向上皮样细胞转变的过程,而上皮样细胞则可直接越过,加速并提高了诱导效率。精原干细胞是位于睾丸曲细精管生精上皮上的一群上皮样成体干细胞,具有高度的自我更新和分化潜能。此前人们在运用经典四因子使小鼠精原干细胞产生iPSCs,发现其形成时间要比成纤维细胞诱导产生的iPSCs缩短一半,还发现由精原干细胞诱导产生的iPSCs在小鼠嵌合体后代较其它细胞来源上致瘤率大大降低。本研究通过四种转录因子Oct4,Sox2,Klf4,c-Myc并结合相关小分子复合物对关中黑猪精原干细进行诱导,获得了多潜能性的类iPSCs。本研究的主要内容如下:猪精原干细胞的分离培养及相关鉴定:小鼠精原干细胞分离与鉴定研究较多,但猪精原干细胞分离培养的方法研究还较少。我们参考了本实验室建立的精原干细胞分离方法。通过酶联合消化再利用差速贴壁的方法对分离得到的细胞进行纯化,并进行了鉴定。猪精原干细胞向多能性干细胞的诱导:原代分离猪精原干细胞,采用慢病毒体系,将鼠Oct4/Sox2/Klf4/c-Myc四因子导入猪精原干细胞,通过特定的培养条件将其诱导为iPSCs,并对重编程的细胞进行了细胞和分子生物学特性鉴定。获得的iPSCs具有多能性基因表达的能力,同时还具有向三胚层分化的潜能。