【摘 要】
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根据蓝舌病病毒已报道的外壳蛋白VP基因序列保守区设计合成两对引物,以蓝舌病病毒内蒙分离株总RNA为模板,逆转录合成cDNA第一链;经PCR扩增并回收扩增后的DNA片段,与pGEM-T载
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根据蓝舌病病毒已报道的外壳蛋白VP<,2>基因序列保守区设计合成两对引物,以蓝舌病病毒内蒙分离株总RNA为模板,逆转录合成cDNA第一链;经PCR扩增并回收扩增后的DNA片段,与pGEM-T载体连接构成重组质粒,转化大肠杆菌JM109;筛选出含有插入片段的重组质粒,用PCR法鉴定后,获得了带有蓝舌病病毒内蒙分离株的外壳蛋白VP<,2>基因部分片段的cDNA克隆,序列分析表明此片段长为249bp,与蓝舌病病毒澳大利亚株同源性为40﹪.用结合高辛的11-dUTP标记克隆的蓝舌病病毒内蒙分离株cDNA片段,制备成探针,通过核心酸斑点杂交对粗提取的不同来源蓝舌病病毒RNA进行了检测,结果表明此探针对蓝舌病病毒内蒙株具有特异性,且灵敏度高,可探测出50pg的病毒RNA.该研究为蓝舌病病毒内蒙分离株的进一步鉴定创造了必要的条件.
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