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目的:近年来研究发现,多囊卵巢综合征(Polycystic ovarian syndrome, PCOS)患者卵巢局部存在胰岛素抵抗(insulin resistance , IR),并与PCOS生殖功能障碍密切相关。但PCOS卵巢局部胰岛素抵抗分子机制尚不十分清楚。本研究检测了PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物1﹝IRS-1﹞和底物2﹝IRS-2﹞蛋白表达及酪氨酸磷酸化的程度,以探讨PCOS患者卵巢局部胰岛素抵抗的分子机制。同时研究胰岛素、黄体生成激素(LH)和胰岛素增敏剂罗格列酮对卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2蛋白表达及酪氨酸磷酸化的影响,探讨高胰岛素血症和高LH血症在PCOS卵巢局部胰岛素抵抗中的作用,以及罗格列酮改善PCOS卵巢局部胰岛素抵抗的作用机理。方法:收集行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后卵巢黄素化颗粒细胞,采用放射免疫法检测两组血清黄体生成素(luteinizing hormone, LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone, FSH)、睾酮及空腹血清胰岛素(fasting insulin,FIN)水平;采用葡萄糖氧化酶法测定各组空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)水平;利用稳态模型(homeostasis model assessment, HOMA)计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用RT-PCR、免疫印迹(Western-blot)及免疫沉淀法检测两组卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2mRNA的表达、蛋白含量及酪氨酸磷酸化程度。同时观察不同浓度的胰岛素(0,10,100,1000μU/ml)、LH(0,20,200,2000mIU/mL)及罗格列酮(0,1,10,100,1000,10000nM/L)体外对两组患者卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2mRNA的表达、蛋白含量及酪氨酸磷酸化程度的影响。结果:(1)PCOS患者血清LH、LH/FSH、睾酮、FIN及HOMA-IR均明显高于对照组(P<0.05);(2)与对照组比较,PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1mRNA的表达及蛋白含量显著增加(P<0.05),IRS-2mRNA的表达及蛋白含量显著降低(P<0.05);(3)PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2酪氨酸磷酸化程度均较对照组明显降低(P<0.05)。(4)生理剂量胰岛素(10μU/ml)对两组患者黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白表达无显著影响(P>0.05),但超生理剂量胰岛素(100μU/ml,1000μU/ml)作用后,两组患者黄素化颗粒细胞IRS-1mRNA及蛋白表达均明显增高(P<0.05),而IRS-2mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。两组患者黄素化颗粒细胞对胰岛素反应性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(5)不同浓度LH作用后,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05),IRS-2mRNA及蛋白表达变化不明显(P>0.05);正常对照组黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白表达均无显著变化(P>0.05)。(6)不同浓度罗格列酮作用后,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),IRS-2mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05),同时IRS-1和IRS-2酪氨酸磷酸化水平也显著增加(P<0.05),而正常对照组黄素化颗粒细胞IRS表达及酪氨酸磷酸化水平无显著变化(P>0.05)。结论:(1)PCOS患者卵巢局部存在胰岛素抵抗,其原因可能与IRS-1和IRS-2蛋白表达及酪氨酸磷酸化异常有关。(2)PCOS患者胰岛素抵抗/高胰岛素血症通过提高卵巢颗粒细胞IRS-1蛋白表达,降低IRS-2蛋白表达参与患者卵巢生殖功能障碍发生。(3) PCOS异常增高的LH可能通过增加黄素化颗粒细胞IRS-1蛋白表达参与了患者卵巢局部选择性胰岛素抵抗的发生。(4)罗格列酮可以通过调整IRS-1和IRS-2表达失衡,提高IRS-1和IRS-2酪氨酸磷酸化水平,改善PCOS患者卵巢局部胰岛素抵抗。