【摘 要】
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本论文主要包括以下两部分内容:一、真菌诱导子对青蒿发根生长和青蒿素生物合成的影响 用3种真菌诱导子[大丽花轮枝孢(Verticillium dahliae Kleb.)、葡枝根霉(Rhizopus stolonifer (Ehrenb.ex Fr.)Vuill)和束状刺盘孢(Colletotrichumdematium(Pers.)Grove)]分别处理青蒿(Ar temisia annua
【出 处】
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中国科学院大学(中国科学院植物研究所)
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本论文主要包括以下两部分内容:一、真菌诱导子对青蒿发根生长和青蒿素生物合成的影响 用3种真菌诱导子[大丽花轮枝孢(Verticillium dahliae Kleb.)、葡枝根霉(Rhizopus stolonifer (Ehrenb.ex Fr.)Vuill)和束状刺盘孢(Colletotrichumdematium(Pers.)Grove)]分别处理青蒿(Ar temisia annua L.)的发根,这3种真菌诱导子均能促进发根中青蒿素的合成,其中以大丽花轮枝孢的诱导效果最好;对细胞生长均没有明显影响。经大丽花轮枝孢处理的发根中青蒿素含量达1.12mg/gDW,比对照(0.77mg/g DW)提高45%。诱导子的作用效果与诱导子浓度、诱导子作用时间及发根的生长状态有关。对大丽花轮枝孢来说,诱导子作用的最适浓度为每毫升培养基含糖0.4 mg;发根在指数生长末期对诱导作用最敏感;在加入诱导子4d后收获发根,发根中的青蒿素含量最高。二、早花基因FPF1、CO对青蒿开花时间的影响及开花与青蒿素生物合成的相关性 1.将来源于拟南芥的早花基因Flowering Promoting Factor1(FPF1)插入到植物表达载体pBI121中,构建CaMV 35S启动子控制下含FPF1基因的植物表达载体pBI121FPF1,用含有pBI121FPF1质粒的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404感染青蒿(Artemisia annua L.)叶片并诱导丛生芽,经卡那霉素筛选,获得转基因抗性植株。PCR、PCR-Southern blot及Southern blot检测表明,外源基因FPF1已整合到青蒿基因组中;RT-PCR及RT-PCR Southern blot分析表明,外源基因在转录水平上已有表达。在短日照条件下,FPF1转基因植株的开花时间较对照提前20天左右,但提早开花的转基因植株与未开花的对照其青蒿素含量无明显差异,即提早开花并不能使开花植株的青蒿素含量有所提高,开花与青蒿素合成之间可能没有直接的关系。 2.将拟南芥的早花基因CONSTANS(CO)置于CaMV 35S启动子之下,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404介导转入青蒿(Artemisia annuaL.),使之在青蒿中表达,并得到了抗性植株。PCR、PCR-Southern blot及Southernblot险测表明,外源基因 CO己整合到青蒿基因组中:RT-PCR及 RT-PCR Southernblot分析表明,外源基因在转录水平上己有表达。在短日照条件下,CO转基因植株的开花时间较对照提i1) 2周左右,但提早开花的转基因植株的青蒿素含量与未开花的对照无明显差异,即植株开花前青蒿素含量的提高并不是山于开花本身引起的,再次证明,开花与青蒿素合成之间可能没有直接的关系。
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