子痫前期外周血及胎盘组织中相关蛋白的研究

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目的应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术联合液相色谱—串联质谱(LC-MS/MS)技术检测子痫前期及正常妊娠孕妇血浆中的差异蛋白,从而筛选出潜在的子痫前期血浆生物标志物,并初步探讨其在子痫前期中的可能作用机制。  方法临床收集2012年6月~2013年6月在青岛大学附属医院产科住院期间子痫前期患者60例,其中子痫前期重度患者30例(重度组),子痫前期轻度患者30例(轻度组),同期正常妊娠孕妇30例(对照组)。采血分离血浆提取总蛋白,随后对重度组和对照组血浆总蛋白进行变性、还原、酶解,iTRAQ标记后用质谱仪进行鉴定,得到差异表达蛋白。选取差异蛋白Gelsolin、S100A8应用ELIAS、实时荧光定量PCR技术进行进一步验证。  结果①iTRAQ联合LC-MS/MS技术共鉴定到血浆差异蛋白234个,重度组较对照组表达丰度相差1.5倍以上(上调比值>1.50或下调比值<0.67)且经t检验证实差异有统计学意义的蛋白质点共有24个,其中14个蛋白点较对照组表达上调,另10个点较之表达下调。②轻度组及重度组子痫前期患者血浆中Gelsolin水平分别为(0.288±0.013)ng/L、(0.363±0.152) ng/L,明显高于对照组(0.204±0.101)ng/L,分别比较,差异均有统计学意(P<0.05);③轻度组及重度组子痫前期患者血浆中S100A8水平分别为(0.687±0.064) ng/L、(0.928±0.101)ng/L,明显高于对照组(0.550±0.073)ng/L,分别比较,差异均有统计学意(P<0.05);④单因素方差分析显示子痫前期患者胎盘组织中Gelsolin mRNA水平明显高于对照组(0.90±0.037),再比较轻度组(2.44±0.614)及重度组(4.42±1.059),差异有统计学意义(P<0.05);⑤单因素方差分析显示子痫前期患者胎盘组织中S100A8 mRNA水平明显高于对照组(0.98±0.04),再比较轻度组(3.83±0.879)及重度组(7.59±1.803),差异有统计学意义(P<0.05);⑥子痫前期患者血浆中Gelsolin水平与胎盘组织中Gelsolin mRNA的表达水平无相关性(r=0.163,P>0.05);⑦子痫前期患者血浆中S100A8水平与胎盘组织中S100A8 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.701,P<0.01)。  结论 iTRAQ联合LC-MS/MS技术能够有效地筛选出子痫前期血浆差异蛋白。Gelsolin和S100A8的差异表达与子痫前期的发生发展存在一定关系,S100A8或许可以作为子痫前期特异性血浆蛋白标记物,为子痫前期的早期诊断打下一定的理论基础。
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