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目的:口腔黏膜恶性黑色素瘤,是一种高侵袭,进展快,易转移且预后差的恶性肿瘤,五年生存率仅20-25%。虽然手术、放化疗、综合序列治疗等常规治疗方案都在不断地发展创新,但是缺乏可靠的临床前研究平台造成OMM靶向治疗的策略依旧严重匮乏。所以构建适宜的研究平台能够辅助进行药物筛选、药效评估,模拟肿瘤侵袭转移等临床特征,进而推动靶向治疗策略的评估、转化和应用成为了迫在眉睫的问题。肿瘤血管形成是肿瘤发生发展的重要因素,不仅为肿瘤生长增殖提供养分,同时是恶性肿瘤发生侵袭、转移的必要条件。恶性黑色素瘤主要有两种循环模式,肿瘤内皮血管及血管拟态。所以,靶向血管生成药物治疗黑色素瘤时需在抑制血管生成同时兼顾抑制血管拟态。本研究通过比较肿瘤的生长状况、转移情况,确定最理想、高效的PDOX建模方法;同时我们选择了阿西替尼(血管生长抑制剂)作为干预措施,研究其在OMM体内实验中抗肿瘤的作用以及相关机制研究,为临床应用阿西替尼治疗OMM提供新的思路。方法:1.将新鲜OMM肿瘤块接种至小鼠口腔颌面部;利用肿瘤组织分离培养病人源性肿瘤原代细胞,并行IF、IHC和皮下成瘤鉴定是否为OMM细胞,将处于指数增殖期的PDC注射至口腔颌面部,建立PDOX模型;观测比较多种方法构建的PDOX模型的肿瘤生长状态,利用HE和免疫组织化学染色比较PDOX模型以及相应的患者和PDX模型;2.构建OMM的原位及异位移植瘤模型,将阿西替尼治疗作为阳性对照组,裸鼠通过灌胃给予阿西替尼或羧甲基纤维素钠,通过观察测量小鼠肿瘤体积、小鼠的体重变化以及远处转移率来确定阿西替尼对OMM原位或异位异种移植瘤模型的药物效果,对肿瘤组织切片行苏木素伊红染色、免疫组织化学染色等方法观察阿西替尼对OMM微循环模式的作用。结果:1.肿瘤块分离得到的细胞经过免疫荧光染色,皮下成瘤及免疫组织化学染色等方法证实为口腔黏膜恶性黑色素瘤细胞。利用肿瘤组织和PDC构建口腔黏膜恶性黑色素瘤PDOX模型,其组织学形态和遗传学水平均与患者口腔黏膜恶性黑色素瘤表现一致。肿瘤生长状态监测和局部淋巴结转移检测发现颊囊黏膜下接种肿瘤组织块来构建PDOX模型较颊囊黏膜下和舌部注射PDC所构建的PDOX模型,具有更高的成瘤率、淋巴结转移率、肿瘤组内差异最小。2.与荷瘤对照组比较,阿西替尼能够显著抑制OMM原位与异位移植瘤模型的肿瘤体积增长,且同时小鼠无不良反应。PDOX模型OMM淋巴结转移率明显降低,HE染色显示:荷瘤对照组肿瘤细胞围绕血管周围生长旺盛,液化坏死区域少;阿西替尼实验组肿瘤组织中可见大片液化坏死区域。此外,研究进一步发现阿西替尼实验组Eph2A和MMP-2在蛋白水平上表达明显降低,肿瘤内血管密度降低,抑制了VM新生,而HIF1A表达水平明显增高。结论:颊囊移植肿瘤组织法构建的原位移植瘤模型,较好地模拟了OMM临床进展,是最适合口腔黏膜恶性黑色素瘤临床、基础研究以及药物筛选的动物模型。在OMM原位和异位模型均显示阿西替尼通过VEGF信号通路抑制OMM血管拟态形成,从而有效抑制口腔黏膜恶性黑色素瘤生长和远处转移,并且对小鼠无明显药物毒性,为OMM临床治疗提供新的方案。