灰飞虱和褐飞虱bursicon基因的分子特性

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Bursicon是首次在丽蝇Calliphora erythocephala中发现的一种多肽类激素,其主要功能有三方面:骨化、黑化和展翅。为探讨灰飞虱Laodelphax striatellus和褐飞虱Nilaparvata lugens的bursicon基因的功能,首先根据相近物种同源序列比对结果设计简并引物,克隆获得两种飞虱bursicon基因的部分片段,再利用RACE技术克隆获得全长cDNA序列;通过荧光定量PCR研究灰飞虱体内bursicon基因的时相表达,利用RNAi技术研究bursicon基因在褐飞虱体内的生理功能。相应结果如下:(1)利用RT-PCR(reverse transcription PCR)和RACE技术从灰飞虱体内克隆获得1,126bp的burs(bursicon alpha)和761bp的pburs(bursicon beta orpartner of burs)全长序列,将其分别命名为Lsburs和Lspburs。生物信息学分析表明:Lsburs开放阅读框长483bp,5’-非翻译区(5’-UTR)共142bp,3’-UTR共501bp,具有真核生物典型的加尾信号序列AATAAA和poly(A)尾巴,编码160个氨基酸,该蛋白具有2个N-豆蔻酰化位点、3个酪蛋白激酶II磷酸化位点以及2个蛋白激酶C磷酸化位点。Lspburs开放阅读框长417bp,5’-UTR共66bp,3’-UTR共278bp,具有典型的加尾信号序列AATAAA和poly(A)尾巴,编码138个氨基酸,该蛋白具有2个N-豆蔻酰化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点以及1个酪氨酸激酶磷酸化位点。qRT-PCR结果表明:Lsburs和Lspburs在灰飞虱各龄期均有转录表达,并在若虫期随龄期增加呈上升趋势,在羽化期达到峰值,成虫期表达量逐渐降低。结果暗示bursicon与灰飞虱蜕皮后的外表皮硬化关系密切。(2)利用RT-PCR和RACE技术从褐飞虱体内克隆获得923bp的burs和703bp的pburs全长序列,将其分别命名为Nlburs和Nlpburs。生物信息学分析表明:Nlburs开放阅读框长474bp,5’-UTR共149bp,3’-UTR共300bp,具有真核生物典型的加尾信号序列AATAAA和poly(A)尾巴,编码157个氨基酸,该蛋白具有1个N-豆蔻酰化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点以及2个蛋白激酶C磷酸化位点。Nlpburs开放阅读框长417bp,5’-UTR共73bp,3’-UTR共213bp,含有典型的poly(A)尾巴,但没有加尾信号序列,编码138个氨基酸,该蛋白具有1个N-豆蔻酰化位点、1个酪氨酸磷酸化位点、3个酪蛋白激酶II磷酸化位点以及1个蛋白激酶C磷酸化位点。系统发育树分析显示褐飞虱和灰飞虱Bursicon的亲缘关系非常接近。RNAi结果表明:沉默Nlburs对雄性褐飞虱的着色有一定的延后作用,而对雌性褐飞虱几乎没有影响。
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