枯草杆菌血栓溶解酶的液体发酵及分子修饰研究

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本论文以稻草中分离的枯草杆菌SBS为出发菌株,以枯草杆菌血栓溶解酶(Bacillus Thrombolytic enzyme,以下简称BTE)为研究对象,研究了BTE产生的液体发酵工艺以及BTE的分离和纯化并对BTE分子进行了聚乙二醇(PEG)化修饰,以期改进其酶学性质,为今后的应用奠定基础。   结果表明:通过正交实验得出的最优培养基组成(g/L):燕麦麸皮7,可溶性淀粉3,大豆分离蛋白25,CaCl20.2。采用优化后的培养基进行了15L发酵罐的发酵试验,菌种种龄10h,接种量5%,通气搅拌,温度37℃,初始pH8.0,发酵70h后BTE酶活力达到542 IU/mL。   BTE分离和纯化方法的研究结果表明:发酵液经过25%-70%硫酸铵分级沉淀、DEAE-52阴离子交换色谱和Sephadex G75凝胶过滤色谱等步骤,得到BTE纯酶,回收率为80.66%,纯化倍数为12.27,比活达到11854 IU/mg。该酶经SDS-PAGE显示为单一电泳带,分子量为32KDa。经.Fibrin-SDS-PAGE电泳检验,粗酶溶液中只有分子量为32 KDa的枯草杆菌血栓溶解酶具有溶解血纤维蛋白的能力。   合成了以谷氨酸为中心分子的分枝型PEG修饰剂对BTE进行了定点修饰。实验结果显示修饰后酶的活力急剧下降,SDS-PAGE图谱条带模糊,没有达到预期的效果。
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