论文部分内容阅读
目的:本课题研究大黄素对MCAO再灌注模型大鼠的神经保护作用,并探讨大黄素通过调控PTEN/PI3K/AKT信号途径对MCAO再灌注模型大鼠的神经保护作用的影响。方法:(1)将健康成年雄性SD大鼠30只分为五组:假手术组(sham组)6只、MCAO再灌注模型组(MCAO组)6只、大黄素低剂量组(MCAO+EL组)6只、大黄素中剂量组(MCAO+EM组)6只、大黄素高剂量组(MCAO+EH组)6只。造模完成后,立即灌胃给药。大黄素用0.5%的羧甲基纤维素钠溶液配制,其低、中、高剂量组的给药剂量依次为25mg·Kg-1·d-1、50mg·Kg-1·d-1和100mg·Kg-1·d-1,给药一次。给药24h后取材,用于TTC染色。(2)将健康成年雄性SD大鼠27只分为三组:假手术组(sham组)9只、MCAO再灌注模型组(MCAO组)9只、大黄素组(MCAO+Emodin组)9只。造模完成后,立即灌胃给药。大黄素给药剂量为50mg·Kg-1·d-1,给药一次。给药24h后取材。用于Nissl染色,NeuN、C3、GFAP免疫荧光染色,中性粒细胞染色,E-selectin、GFAP、PTEN、p-AKT和AKT蛋白表达量的检测。(3)健康成年雄性SD大鼠18只,随机分为侧脑室注射人工脑脊液组9只,侧脑室注射PI3K抑制剂组9只。从人工脑脊液组和PI3K抑制剂组中分别随机选取6只,进行MCAO再灌注造模,造模后分为模型组和大黄素给药组,其分别为人工脑脊液假手术组(sham组)3只、PI3K抑制剂假手术组(LYsham组)3只、人工脑脊液模型组(MCAO组)3只、PI3K抑制剂模型组(LYMCAO组)3只、人工脑脊液给药组(MCAO+Emodin组)3只和PI3K抑制剂给药组(LYMCAO+Emodin组)3只,PI3K抑制剂浓度为LY294002浓度为1OμL1OMm,大黄素给药剂量为50mg·Kg-1·d-1,给药一次。24h后取大鼠缺血侧脑组织,检测其 p-AKT、AKT、p65、Bcl-xl、Bax、IL-1β 的表达量。结果:(1)MCAO再灌注模型大鼠经大黄素作用24h后,取材,与模型组相比,TTC染色结果显示,MCAO+EM组和MCAO+EH组能够降低大鼠缺血侧脑梗死体积,,.MCAO+EL不能降低大鼠脑梗死体积;Nissl染色结果显示,与sham组相比,模型组Nissl小体阳性表达减少,经大黄素作用后,Nissl阳性细胞数量表达显著上升;免疫荧光法对NeuN染色结果显示,与sham组相比,模型组NeuN表达减少,给药后NeuN表达显著上升;与sham组相比,模型组TNF-α、IL-1βmRNA表达显著增加,给药后TNF-α、IL-1βmRNA表达与模型组相比显著下降。(2)MCAO再灌注模型大鼠经给大黄素作用24h后,取材,结果显示,与sham组相比,模型组PTEN、E-selecin表达显著增加,给药后表达显著下降;模型组p-AKT的表达显著下降,给药后明显升高;免疫荧光结果显示,与sham组相比,模型组C3、GFAP表达显著增加,给药后其表达显著下降;中性粒细胞染色结果显示,大鼠造模后病灶区的中性粒细胞显著增多,给药后能明显减低中性粒细胞在病灶区的聚集。(3)大鼠侧脑室注射PI3K抑制剂后进行MCAO再灌注造模,大黄素给药24h后,取材,结果显示,与 MCAO+Emodin 组相比,LYMCAO+Emodin 组 p-AKT/AKT、Bcl-xl表达显著下降,而p65、Bax及IL-1β明显上升。结论:(1)大黄素能有效降低MCAO再灌注大鼠的脑梗死体积,减少由MCAO再灌注引起的炎症损伤,抑制细胞凋亡;并减少中性粒细胞的募集,补体系统的激活以及血管内皮细胞黏附因子的生成,因此具有良好的神经保护作用和抗炎作用。(2)大黄素具有的神经保护作用和抗炎作用是通过调控PTEN/PI3K/AKT信号实现的。