乌桕内生真菌的分离及抑菌活性研究

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hughy
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植物内生菌具有生长周期短、易于规模化发酵等优点,可以作为环境友好型农药的来源,在新农药的开发方面具备很大的发展空间。乌桕作为一种药用植物,在药物开发领域具有潜在的价值。  本研究利用平板培养法从乌桕茎叶中分离获得5种内生真菌,分别为UL-A、UL-B、US-A、US-B与US-D,并以植物病原真菌苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、苹果叶枯炭疽菌与苹果果实链格孢菌为供试菌株,采用微量滤纸片法测定了5株内生真菌发酵乙醇粗提物的抑菌活性,其中 UL-B内生菌发酵乙醇粗提物的对4株苹果病原真菌具有明显的抑制作用,其中,对苹果轮纹菌的抑菌率最高,为61.52%。采用系统溶剂萃取法,进一步研究了菌株UL-B乙醇粗提物的不同溶剂萃取物的抑菌活性,发现乙酸乙酯萃取物抑菌活性较好,其中对苹果腐烂菌的EC50仅为15.7μg/mL,对苹果叶枯炭疽菌的EC50为26.8μg/mL。  因此,对菌株UL-B进行了ITS-5.8S rDNA序列分析鉴定,结果表明菌株UL-B属于真菌,半知菌亚门,腔孢纲,球壳孢目,拟茎点霉属,与拟茎点霉(JF441201)有99%的同源性,命名为Phomopsissp.UL-B。  采用硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、制备薄层色谱、凝胶柱色谱和制备高效液相色谱方法,从菌株 Phomopsissp.UL-B发酵产物的乙酸乙酯萃取物中分离纯化得到5个化合物,通过紫外、核磁共振等现代波谱学技术及与文献数据比对等方法进行结构鉴定,结果表明化合物 PS-1为4-(2-hydroxyethyl)phenol,PS-2为 dibutyl phthalate,PS-3为(4R,6S)-p-menth-1-ene-4,6-diol,PS-4为(3R)-6-hydroxymellein,PS-5为Cytochalasin H。对化合物进行抑菌活性测定,化合物PS-2,PS-4和PS-5具有较强的抑菌活性,其中PS-5的抑菌活性最强,其对苹果叶枯炭疽菌和棉花枯萎菌的最小抑制浓度为0.31 mg/mL,对白菜黑斑病菌,柑橘炭疽菌和苹果轮纹病菌的最小抑制浓度仅为0.15 mg/mL。
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