当归超临界提取物及馏分对结直肠癌的预防作用研究

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:Wang_Sheng
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目的:本论文以探讨当归超临界提取物及馏分对结直肠癌预防作用为目标,从体外细胞实验研究当归超临界挥发油总提取物及其分子蒸馏馏分抗炎、抗氧化的能力,以及对Nrf2/ARE通路的调节作用。采用AOM/DSS小鼠结直肠癌模型验证当归超临界提取物及馏分的癌症预防的作用,并与细胞实验相比较。方法:以稳定转染ARE基因的人肝癌细胞HepG2细胞为模型,给药刺激6h后,分别采用报告基因、实时荧光PCR的方法来检测ARE荧光素酶、Nrf2、NQO1和HO-1基因表达的变化,从而比较当归超临界挥发油总提取物及馏分的抗氧化能力;以脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7建立炎症模型,采用Griess试剂法,检测炎症细胞上清液中释放的炎症因子一氧化氮(NO),实时荧光PCR法检测炎症相关基因COX-2,iNOS表达的变化,确定当归超临界挥发油总提取物及馏分的抗炎能力;采用氧化偶氮甲烷与葡聚糖硫酸钠(AOM)/(DSS)化学诱导方法建立小鼠结直肠癌模型,比较筛选出的最优馏分与当归超临界总提取物癌症预防作用能力。将小鼠按体重随机分为6组:正常对照组,模型组(AOM+DSS),当归超临界总提取物高剂量组(AOM+DSS+60mg/kg),当归超临界总提取物低剂量组(AOM+DSS+15mg/kg),馏分4高剂量组(AOM+DSS+60mg/kg).馏分4低剂量组(AOM+DSS+15mg/kg).每周称量小鼠体重,记录小鼠精神状态。17周末,用乙醚将小鼠麻醉,眼眶取血。用ELISA法检测血清中TNF-α,SOD. NF-K B,Nrf2水平。取小鼠结直肠,记录各组肿瘤个数、位置,计算肿瘤发生率,HE染色查看各组病理组织学差异结果:(1)细胞实验:各药物组激活ARE荧光素酶的能力有浓度依赖趋势,浓度越高,激活能力越强;馏分4激活ARE荧光素酶、Nrf2.HO-1.NQO1的能力强于总提取物和其他馏分,表现出较强的抗氧化活性;各药物组对NO的释放都有抑制作用,以总提取物,馏分4,馏分5的效果最好。作用强度:总提取物>馏分4≈馏分5>其他馏分;馏分4,5,6能够显著抑制COX-2.iNO S的表达,而且明显强于总提取物,且作用强度非常接近。(2)动物实验:正常对照组小鼠未见肿瘤出现,模型组小鼠在实验过程中出现血便、腹泻、体重下降,后期出现脱肛,肿瘤发生率为100%。当归超临界总提取物高剂量组和低剂量组肿瘤发生率均为87.5%,馏分4高剂量组和低剂量组肿瘤发生率分别为75%,62.5%;与模型组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);给药组TNF-α.NF-K B水平比模型组要低,SOD.Nrf2水平较模型组要高,且以馏分4高剂量组的作用最显著结论:(1)细胞实验结果表明当归的脂溶性成分能够激活Nrf2/ARE通路,发挥抗炎抗氧化的作用。馏分4的作用效果最显著(2)当归脂溶性成分能够干预结直肠癌的发生发展,且馏分4作用效果较当归超临界总提取物显著。以上结果表明当归脂溶性成分之间的比例及组成影响当归的癌症预防作用,值得进一步研究。
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