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大别山土黑猪,是安徽大别山地区以六白猪、霍寿黑猪等地方品种为母本,杜洛克猪为父本杂交而成的猪种群统称。大别山土黑猪具有瘦肉率高、繁殖率高以及抗逆性强的杂交优势,是急需推广的地方杂交品种。同时,大别山土黑猪养殖产业也是扶贫和乡村振兴的支柱产业。然而抗生素滥用导致猪体内残留药物、产生耐药性以及排泄粪便污染是养殖业面临的重要问题。随着2020年禁抗政策的出台后,研制适用于生猪使用的抗生素替代品是养猪业研究的热点。微生态制剂是重要的抗生素替代品之一,主要包括乳酸菌制剂、芽孢杆菌制剂等,具有促进动物生长、治疗腹泻等功能。然而动物内源性微生态制剂易对其他动物产生过敏反应,因此研制适用于大别山土黑猪专用的新型替抗产品极为重要。本研究拟在健康的大别山土黑猪仔猪粪便中分离筛选出乳酸菌进行生物活性分析,优化发酵条件,制备出大别山土黑猪专用的微生态制剂,并对其进行动物安全性初步评价。主要结果如下:1、大别山土黑猪源乳酸菌的分离筛选与活性分析本试验从健康的大别山土黑猪仔猪粪便中分离出13株乳酸菌,60℃条件下的耐热实验筛选出存活率超过20%的5株(A6、A7、B7、D7、G9)乳酸菌。经16S rDNA鉴定,除G9菌株为干酪肠球菌(Enterococcus casei)外,其余菌株均为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。活性分析表明A7屎肠球菌(Enterococcus faecium)和D7屎肠球菌(Enterococcus faecium)具有良好的生物活性,可作为下一步发酵优化的备选菌株。2、大别山土黑猪源乳酸菌发酵条件的优化通过菌株生长曲线、产酸曲线的检测,结合单因素试验、Plackett-Burman试验、响应面分析,在温度、接种量、初始pH、装液量等因素优化基础上筛选出其中影响较大的因素,并绘制响应面三维图及等高线图。结果表明,A7菌株在培养时间为12h、初始pH为5.8、装液量为40%的条件下发酵效果最佳。D7菌株在培养时间为13.5h、初始pH为5.3、温度为38℃的条件下发酵效果最佳。3、大别山土黑猪源乳酸菌制剂的功能初评(小鼠体内试验)为了探讨A7、D7乳酸菌制剂的应用效果,测定了乳酸菌制剂保存期试验,小鼠肠道内乳酸菌定植情况、灌喂后不同日龄小鼠体重变化及小鼠免疫器官相关指数,血清总SOD酶含量与过氧化氢酶(CAT)含量。结果表明,乳酸菌制剂对小鼠生长有一定影响,其中小鼠灌喂后肝脏与脾脏变化显著(P<0.05),而各组之间小鼠血清T-SOD值活力值与血清总CAT酶活力值之间差异均不显著(P>0.05)。