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目的：在已筛选获得1株高亲和力特异性抗肝癌单链抗体(scFv) DM的基础上,采用结合蛋白质同源模建技术、互补决定区(CDR)移植技术和噬菌体展示技术的抗体库优化法,同步实现人源化和优化非人源氨基酸残基,以获得特异性强、亲和力高、免疫原性低的人源化抗肝癌scFv,为肝癌的早期诊治提供新的方法与手段。方法：通过计算机辅助,采用同源模建技术模建抗肝癌scFv DM的三维结构；通过BLAST,从GenBank中选择与scFv DM的重链(VH)和轻链(VL)同源性最高的人源抗体序列为人源化模板；通过分子结构分析和序列分析,确定对抗原结合位点的构象有重要影响的骨架区(FR)残基,把难以判断回复突变残基的人、鼠源副本同时编入人源化抗体序列中；通过重叠延伸PCR技术合成人源化抗体全基因,利用噬菌体展示技术构建人源化组合抗体库；通过肝癌细胞筛选阳性克隆,ELISA方法测定各个克隆抗原结合活性；用硫氰酸盐洗脱法测定并比较亲本抗体和人源化scFv的相对亲和力。结果：抗肝癌scFvDM的三维结构示：六个CDR襻位于Fv段的N端,形成一个与抗原结合的口袋,口袋深16.1A。用Prostat验证,模建的三维结构的79.8%的Φ和Ψ分布于Ramachandran图的核心区域,模板1NQB的为83.2%；确定人抗体序列AAW67378和BAB18257分别作为VH和VL人源化模板,FR同源性分别为76.1%和71.6%；确定人、鼠VH和VL的FR序列分别有20个和23个不同残基,其中28个人源化残基、8个回复突变残基和7个难以确定残基；成功构建人源化组合抗体库,抗体库包含了由25不同重链和22不同轻链组成的128种人源化DM；经过筛淘及ELISA鉴定,获得HDM1、HDM2和HDM3三个阳性克隆,相对亲和力指数分别为：HDM1 1.6mol/L、HDM2 1.2mol/L。HDM3 2.2mol/L结论：成功模建抗肝癌scFv DM的三维结构,模拟结构合理可靠；抗体库优化法是一个高效、简便的人源化方法；获得的3株阳性克隆HDM1、HDM2、HDM3与亲本抗体DM同样具有良好的抗原结合特异性和较高的亲和力,为进一步探索在肝癌早期诊疗的临床应用奠定了基础。