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目的:探讨异丹叶大黄素(Isorhapontigenin,ISO)和白藜芦醇(Resveratrol,RES)抑制骨肉瘤K7M2细胞生长及免疫调节的作用,并明确相应的细胞和分子机制,为骨肉瘤的治疗提供新的实验依据。方法:(1)不同浓度的ISO和RES体外处理K7M2细胞,MTT检测细胞增殖情况。(2)流式细胞术检测ISO和RES对K7M2细胞凋亡和细胞周期的影响。(3)实时定量多聚酶链聚合反应(RT-qPCR)检测ISO和RES对K7M2细胞凋亡和细胞周期相关基因表达量的影响。(4)蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测ISO和RES对K7M2细胞凋亡和细胞周期相关蛋白表达量的影响。(5)流式细胞术检测ISO和RES在体外对K7M2细胞表面MHC分子表达量的影响。(6)构建荷骨肉瘤小鼠模型,每天监测肿瘤体积及小鼠体重,并根据小鼠体重于瘤周注射不同浓度的ISO和RES,第16 d处死小鼠并获取肝、肾和移植瘤组织,将肝肾组织染色观察药物毒副作用,流式细胞术检测肿瘤细胞表面MHC分子表达量和移植瘤组织中浸润的CD8~+T细胞、NK细胞、NKT细胞、MDSCs和Treg细胞百分比变化。结果:(1)5μM,10μM,20μM,40μM和80μM的ISO和RES处理细胞24 h、48 h和72 h后均能不同程度抑制骨肉瘤K7M2细胞的增殖,且ISO的抑制效应呈时间、剂量依赖性;在48 h内,RES抑制骨肉瘤K7M2细胞增殖具有时间剂量依赖性,但72 h时,剂量依赖性不明显。(2)ISO(20μM,40μM,60μM)和RES(40μM,60μM)处理细胞48 h后,K7M2细胞凋亡均显著增多,存活细胞显著减少;ISO(40μM,60μM)处理细胞48 h后,G0/G1期细胞显著增多,阻滞细胞周期于G0/G1期;RES(20μM,40μM)处理细胞48 h后,S期细胞显著增多,阻滞细胞周期于S期。(3)ISO(40μM,60μM)和RES(20μM,40μM)处理细胞48 h后,K7M2细胞Mcl-1、Xiap、Kras和Bcl-2mRNA表达水平显著降低,CyclinE1、Bax和Caspase-3 mRNA表达水平显著增高;ISO组CyclinD1 mRNA表达水平显著降低,RES组无显著变化。(4)ISO(40μM,60μM)和RES(20μM,40μM)处理细胞48 h后,K7M2细胞Mcl-1、Xiap、Kras和Bcl-2蛋白表达水平显著降低,CyclinE1、Bax和Caspase-3的蛋白表达水平显著增高;ISO组CyclinD1蛋白表达水平显著降低,RES组无显著变化。(5)ISO(40μM,60μM)和RES(20μM,40μM)体外处理细胞48 h后,K7M2细胞表面MHCⅠ和MHCⅡ类分子表达显著增强。(6)ISO(75 mg/kg,150 mg/kg)和RES(50 mg/kg,100 mg/kg)瘤周注射用药16 d后,各用药组移植瘤生长体积较对照组均被显著抑制,且药物无明显毒副作用;肿瘤细胞表面MHCⅠ和MHCⅡ类分子的表达均显著增强;同时,移植瘤组织中CD8~+T细胞、NK细胞、NKT细胞百分比显著增多,而MDSCs和Treg细胞百分比显著减少。结论:ISO和RES通过调控骨肉瘤细胞K7M2的细胞周期并诱导其细胞凋亡,抑制了K7M2细胞的生长。并且,ISO和RES在体内外均可增强骨肉瘤K7M2细胞的免疫原性,在荷骨肉瘤小鼠体内改善肿瘤组织免疫微环境,使荷骨肉瘤小鼠抗肿瘤能力增强,肿瘤生长得到抑制。ISO同RES一样,可能作为抗骨肉瘤的备选药物。