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目的:多囊卵巢综合征(Polycystic Ovary Syndrome,PCOS)是不孕的主要原因之一,占无排卵不孕的75%,以卵泡内膜及间质的增生和过度血管化为主要特征。血管生成及其相关因子在PCOS的发病中有一定的作用。内分泌腺来源的血管内皮生长因子(Endocrine Gland-derived Vascular Endothelial Growth Factor,EG-VEGF)是最近证实的一种选择性的作用于产类固醇内分泌腺的内皮细胞有丝分裂原,在甾体类激素分泌器官如卵巢、肾上腺等表达,在其他重要脏器无表达。血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)是调节正常和非正常血管增生的关键因子,但对血管内皮细胞无选择性。EG-VEGF、 VEGF在PCOS中的研究在国内尚属空白,国外的研究也很少。
本实验采用免疫组化的方法,对PCOS中EG-VEGF的表达进行研究,并与VEGF的表达进行比较,探讨EG-VEGF在PCOS发病机制中的作用,为PCOS的基因治疗奠定理论基础。
材料与方法:
标本来源:收集中国医科大学附属盛京医院1995年9月~2007年2月间收治的PCOS患者手术获得的部分多囊卵巢组织的石蜡标本共63例,另取同期因非PCOS疾病行手术治疗患者的正常卵巢组织20例作为对照,其中卵泡期10例,黄体期10例。
试剂:兔抗人VEGF多克隆抗体购自博士德生物工程有限公司,羊抗人EG-VEGF多克隆抗体购自Santa Cruz Biotechnology公司,SP免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物有限公司,二氨基联苯胺(DAB)显色剂购自福州迈新生物技术有限公司,抗原修复液及磷酸盐缓冲溶液(PBS)自行配制。
实验方法:采用免疫组化SP法,按试剂盒说明进行。其中一抗EG-VEGF稀释浓度为1:50,VEGF为1:100,本研究以已知胎盘组织阳性切片作为阳性对照,以磷酸盐缓冲溶液(PBS)代替一抗作为阴性对照,每例标本常规进行苏木素染色。
结果判定:以细胞浆内出现棕黄色颗粒者为阳性。每例随机选取6个完整而不重叠的视野通过MetaMorph/Evolution Mp5.0/Bx51显微图像分析系统测定EG-VEGF及VEGF蛋白免疫组化反应阳性颗粒的光密度,以6张图像的平均光密度值代表该例的测量值。
统计学方法:采用两样本t检验,直线相关分析,P<0.05为有统计学意义。
实验结果:
EG-VEGF在研究组中的表达水平显著高于对照组(P=0.001)。VEGF在研究组中的表达水平明显高于对照组(P=0.021)。研究组中EG-VEGF的表达水平高于VEGF的表达水平(P=0.036),二者表达无相关性(P=0.327)。对照组中EG-VEGF的表达水平略高于VEGF的表达水平,但差异无统计学意义(P=0.655),二者表达仍无相关性(P=0.928)。
结论:
EG-VEGF蛋白的过度表达促进多囊卵巢综合征患者的血管生成,与多囊卵巢综合征的发生相关。