香蕉actin1启动子的分离及功能鉴定

来源 :华南热带农业大学 海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:szlucky
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香蕉是世界第四大粮食作物,具有重要的经济意义;同时,香蕉果实是理想的植物生物反应器,利用香蕉果实生产人类疫苗和其它药用蛋白有着广阔的前景。但是栽培香蕉多为单性三倍体,具有高度的不育性,传统的常规育种方法难以改良这些香蕉品种,因此香蕉的转基因技术研究显得尤其重要。本研究的目的是分离鉴定适用于香蕉转基因的高效表达启动子,促进香蕉转基因技术的发展。 通过PCR方法从香蕉基因组中克隆到香蕉actin 1基因的部分序列后与GenBank报道序列相比较,同源性高达99%。在此基础上,又通过PCR方法从香蕉基因组中克隆到香蕉actin 1基因5’上游启动子序列。对启动子两个不同区段分别进行克隆及测序,接着用promoter prediction软件和plant care软件进行了启动子及其顺式作用元件的分析。 将该启动子两个片段分别与gus报告基因和nos终止子融合,构建成瞬时植物表达载体pCAMBIA-ACTP和pBI-ACTPS。通过基因枪法用PBI121、pBI-ACTPS和pCAMBIA-ACTP三种植物表达载体对香蕉根、叶和果实进行转化,瞬时表达检测发现两个启动子片段都具有启动报告基因在香蕉不同组织中表达的功能,从而证明了它们的近组成型启动活性。为了进一步比较两者在转录启动活性上的差别,进行了GUS活性比色测定实验,实验结果支持上述结论。
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