肺癌酪氨酸激酶ALK、ROS1、RET融合基因的检测及临床意义探讨

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目的检测ALK、ROS1、RET融合基因在肺癌患者中的发生率,分析其与临床特征之间的关系,为临床上肺癌的分子靶向治疗提供参考依据。方法1.在中南大学湘雅二医院纤维支气管镜室收集205例自2012年10月至2013年4月期间经纤维支气管镜下活检取得的新鲜肺癌或胸膜组织标本。2.用蛋白免疫印迹(Western blotting, WB)技术检测ALK、 ROS1、RET基因蛋白在肿瘤组织中的表达情况。3.在病理科收集WB中检测基因融合阳性病例的福尔马林固定石蜡包埋(Formalin Fixed Paraffin Embedded, FFPE)组织标本,切片后进行免疫组化技术(Immunohistochemistry,IHC)验证。4.分别从年龄、性别、吸烟史、病理类型、病理分化程度这五个临床特征上分别对ALK、ROS1、RET基因突变阳性和阴性的肺癌患者进行对比。5.数据资料采用用连续校正χ2检验(Continuity Correction χ2Test)和Fisher精切概率法(Fisher’s exact test)分别比较ALK、ROS1、RET基因突变阳性和阴性病人的临床特征之间的关系。p<0.05有统计学差异。结果1.205例肺癌患者的总体年龄均数为58.72±9.31岁(32-80岁)。其中男性169例。从吸烟史来分析,非吸烟48例;吸烟157例。在病理类型上,NSCLC163例,SCLC42例。在103例可评估病例中,高分化肺癌19例,中分化40例,低分化44例。2.205例肺癌患者中,6例为ALK基因突变阳性,发生率为2.9%,在NSCLC中为1.8%(3/163);其中5例为ALK融合,1例为ALK突变野生型。5例存在ROS1基因突变,发生率为2.4%,均为NSCLC,其中1例为ROS1突变野生型。2例存在RET融合阳性者均为SCLC。3.ALK融合阳性及阴性患者在年龄(p=0.48)、性别(p=0.95)、吸烟史(p=0.57)、病理类型(p=0.95)之间的差别均无统计学差异;ROS1基因突变阳性及阴性患者在年龄(p=0.21)、性别(p=0.89)、吸烟史(p=0.39)、病理类型(p=0.68)之间的差别均无统计学差异;RET融合基因阳性及阴性患者在年龄(p=0.95)、吸烟史(p=0.35)、病理类型(p=0.06)方面的差别均无统计学差异,与性别(p=0.03)差别有统计学意义。4.ALK融合多见于吸烟(60%,3/5)、男性(80%,4/5),也可在小细胞肺癌中发生;ROS1融合阳性多见于男性(75%,3/4)、鳞癌(75%,3/4)患者;RET融合阳性多见于女性/不吸烟,也可在小细胞肺癌中发生。5.没有发现同时存在ALK. ROSl RET基因变异中两种或两种以上变异的病例。结论1. ALK、ROSl、RET融合代表了肺癌的一种新的分子亚型,也可发生在小细胞肺癌中。2.经纤维支气管镜下所取新鲜肿瘤标本可以作为肺癌患者融合基因检测的有效标本。3.WB是一种可以用来筛选融合基因在肺癌患者中表达情况的有效可行技术。4. ALK, ROSl、RET基因突变在肺癌患者中的发生是互斥的。
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