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随着人们生活水平的提高,猪肉品质已引起了消费者和生产者的广泛重视。肌内脂肪(IMF)含量和背膘厚(BFT)是影响猪肉品质的两个重要指标,其中,IMF对肉的嫩度、多汁性和风味有明显的正效应。本研究以遗传背景有较大差异的地方品种莱芜猪、培育品种鲁莱黑猪、引入品种大白猪为研究对象,对影响猪脂肪细胞分化和脂肪细胞肥大的DGAT1、DGAT2、ADD1、PPARγ、ADRP和PID1六个候选基因进行了定量表达检测和遗传分析;进一步对其中与肌内脂肪显著相关的PID1基因,研究构建真核表达载体,并通过细胞转染进行鉴定,旨在为基因功能的验证奠定基础以及为猪肉质改良的标记辅助选择(MAS)筛选有效的分子标记提供理论依据。主要研究结果总结如下:一、优化建立了TaqMan探针定量分析法,并与SYBR Green real-time PCR方法进行了比较,结果表明,利用TaqMan探针法对ADD1基因进行定量表达检测,能够比SYBR Green real-time PCR更加快速和准确,且不影响相关分析结果。ADD1基因在莱芜猪脂肪组织中表达量最高,在肝脏中未见明显表达,并且脂肪组织和肌肉组织间的表达量差异显著(P<0.05)。ADD1基因的mRNA表达量在肌肉组织中与IMF含量呈显著正相关(P<0.05)。二、DGAT1和DGAT2在同一猪种不同组织中的mRNA表达水平有显著差异(P<0.05),总体表现为:肝脏>脂肪>肌肉;在不同品种猪的3种组织中的mRNA表达量总体表现为:莱芜猪>鲁莱黑猪>大白猪;但DGAT1基因在不同品种猪脂肪组织中的表达顺序为:大白猪>鲁莱黑猪>莱芜猪;相关性分析结果表明,DGAT1基因在3种猪品种间的肝脏组织中mRNA表达量与BFT呈显著正相关(P<0.05);DGAT2基因在3种猪品种间的肌肉组织中mRNA表达量与IMF含量呈显著正相关(P<0.05)。三、PPARγ和ADRP基因在3个品种猪的肌肉组织中的mRNA表达量总体表现为:莱芜猪>鲁莱黑猪>大白猪;相关性分析结果表明,PPARγ的mRNA表达量在3个猪种的肌肉中mRNA表达量与IMF呈显著正相关(P<0.05),ADRP的mRNA表达量在3个猪种的肌肉中与IMF相关不显著(P>0.05),PPARγ的mRNA表达量与ADRP的mRNA表达量呈极显著正相关(P<0.01)。证实了PPARγ与脂肪沉积性状存在一定的内在联系,也提示PPARγ和ADRP基因之间存在一定的联系,其结果为进一步研究莱芜猪高肌内脂肪沉积的分子调控机制提供了新的资料。四、猪品种因素对PID1基因的mRNA表达量具有显著效应(P<0.05),总体表现为:莱芜猪>鲁莱黑猪>大白猪。不同组织对PID1基因的mRNA表达量具有显著效应(P<0.05),总体表现为:肝脏>脂肪>肌肉。品种与组织之间的互作对该基因表达量也具有显著影响(P<0.05);相关性分析结果表明:不同品种间的三种组织中PID1基因的mRNA表达量与IMF含量之间呈现出显著正相关(P<0.05)。五、PID1基因的真核表达载体构建与遗传鉴定克隆得到PID1基因的编码区序列,成功构建了PID1基因的真核表达载体,命名为:pcDNA3.1(+)/PID1。采用脂质体介导转染山羊毛囊细胞,RT-PCR检测PID1基因的mRNA水平的表达,结果表明,转染pcDNA3.1(+)/PID1质粒的毛囊细胞中PID1基因的表达水平显著高于对照组转染空质粒的毛囊细胞(P<0.05);Western blotting检测PID1翻译水平的表达,结果表明,PID1基因的蛋白得到有效表达。这些研究结果为进一步验证PID1基因的功能奠定了基础。综上所述,采用荧光定量分析、克隆测序、Western blotting、真核表达载体构建和细胞转染等一系列研究方法,对参与脂肪形成与分化和肌内脂肪代谢调控的相关基因进行了研究,并对其中与IMF沉积显著相关的PID1基因进行了进一步的功能分析,所得研究结果为进一步揭示猪肌肉中的脂肪沉积与遗传机理奠定了重要的分子基础。