疏水作用色谱（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是二十世纪七十年代初发展起来的一种重要的生化分离技术，在生物大分子的分离中应用广泛。HIC填料常用载体为琼脂糖，以壳聚糖为载体的研究未有报道。本文合成了以壳聚糖（Chitosan，CTS）为载体、以烷基C₄为疏水配基、以戊二醛交联提高机械强度的新型HIC填料，对其合成条件的优化进行了研究，考查了其部分性质，并将其初步应用于α-淀粉酶的分离纯化。1对填料的合成条件进行了优化：（1）0.1～0.15％戊二醛先交联，可产生适当的机械强度。（2）壳聚糖合成浓度为0.2～1％（W/V），即2～10g/L时，填料具有较好的应用性。（3）在CTS浓度为5g/L时，控制丁醛浓度为0.13～0.26％（V/V），即醛氨摩尔比为0.5∶1～1∶1，填料具有较好的应用性。（4）希夫氏反应温度40～70℃均可，反应时间随温度升高而缩短。（5）间歇搅拌为宜。2对填料性质进行了研究：（1）（NH₄）₂SO₄作为流动相盐类，分离效果优于Na₂SO₄。（2）选择0.5～1hr进行吸附。吸附时间过短，疏水吸附来不及平衡；吸附时间过长，易造成生物大分子的变性失活。（3）吸附温度在5～70℃，吸附温度提高，填料对BSA的吸附容量增加；超过70℃，吸附容量迅速下降，蛋白质发生变性。α-淀粉酶则在40℃有最大吸附。一般宜选择20～25℃进行疏水分离。（4）pH对蛋白质与填料间相互作用的影响较为复杂。3新型疏水色谱填料在酶分离纯化上的应用： 用优化条件合成的CTS CL-C₄装柱色谱，一步纯化α-淀粉酶，比活提高1.7倍，总蛋白回收94.67％，酶活收率为72.62％。