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目的:1. 研究盆腔器官脱垂患者与非脱垂患者骶韧带组织中collagen Ⅰ、collagen Ⅲ及Notch信号通路中重要蛋白notch1及hes1的表达。2.研究Notch信号通路的激活与抑制对原代培养的骶韧带成纤维细胞分泌collagen Ⅰ及collagen Ⅲ的影响。3.研究不同程度电刺激对骶韧带成纤维细胞分泌collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的影响及对Notch信号通路的影响。4.雌激素对骶韧带成纤维细胞分泌collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的影响及与Notch信号通路的关系。方法:1.标本采集留取因盆腔器官脱垂行子宫切除+骶骨阴道固定术患者的骶韧带为POP组,同期因子宫良性病变行子宫切除术的非POP患者的骶韧带为非POP组,每组各20例;POP组分为两部分:一部分常温4%甲醛固定;另一部分于-80℃保存。非POP组分为三部分:前两部分同POP组,第三部分至于无血清的无菌高糖DMEM培养基内。2. 分别采用IHC及WB法对POP组及非POP组骶韧带成纤维细胞中的collagen Ⅰ,collagen Ⅲ,notch1及hes1的表达做定性及定量分析。3. 成纤维细胞原代培养及鉴定采用组织块法对非POP组的骶韧带进行成纤维细胞原代培养,通过倒置相差显微镜进行细胞形态学观察,免疫细胞化学进行细胞鉴定。实验细胞均为第3-8代处于对数生长期的人子宫骶韧带成纤维细胞。4. Notch信号通路的激活与抑制用Notch信号通路的激活剂（Jagged1）和抑制剂（DAPT）对成纤维细胞进行不同浓度及不同时间的刺激,用Western Blot法测定各组细胞中collagen Ⅰ,collagen Ⅲ,notch1及hes1的表达。5. 细胞电刺激实验采用Feel Tech Function/Arbitrary Waveform Generator及213铂电极对成纤维细胞进行电刺激,电刺激参数:频率（0HZ、10HZ、100HZ、1000HZ、10000HZ）,电压5v,脉冲占空比:50%,波形:正弦波,刺激时间:2h;刺激结束后分别用免疫细胞化学法及Western Blot法对细胞中的collagen Ⅰ,collagen Ⅲ,notch1及hes1的表达进行检测。6. 雌激素实验将成纤维细胞分为5组:C（control）,D（DAPT 100umol/L）,D+E1100umol/L+17β-estradiol 10-8mol/L),D+E3(DAPT 100umol/L+17β-estradiol10-9mol/L),刺激24h后用Western Blot法对细胞中的collagen Ⅰ,collagen Ⅲ,notch1及hes1的表达进行检测。7. 所得数据采用SPSS 21.0进行统计学分析,P<0.05认为差异具有统计学意义。结果:1.POP组与非POP组组织蛋白结果免疫组织化学法及Western Blot法结果均显示POP组骶韧带中的collagen Ⅰ,collagen Ⅲ,notch1及hes1的表达较非POP组均有明显下降趋势,且差异具有统计学意义。2.成纤维细胞原代培养及鉴定结果1)原代培养第5天,组织块周围可见零星散在细胞爬出,形态各异;第10天,组织块周围的细胞较前明显增多,呈放射状包绕于组织块周围,形态不规则,但以梭形细胞为主,另可见少许三角形及多角形细胞;第20天,组织块周围的细胞排列密集,呈鱼群状或旋涡状,形态规则,仍以梭形细胞为主,无明显排列方向。2)免疫细胞化学染色,波形蛋白为阳性,角蛋白及平滑肌肌动蛋白均为阴性,结合取材部位,提示为人子宫骶韧带成纤维细胞。3.Notch信号通路的激活与抑制实验结果1)激活组中随着Jagged1作用浓度和时间的增加hes1及notch1的表达均升高,hes1表达的升高更为显著;collagen Ⅰ的表达无论在浓度梯度还是时间梯度组均表现为先升高后降低;collagen Ⅲ的表达在浓度梯度组表现为先升高后降低,在时间梯度组表现为持续升高。2)抑制组中随着DAPT作用浓度和时间的增加hes1及notch1的表达均降低,hes1表达的降低更为显著;collagen Ⅰ和collagen Ⅲ的表达均持续降低。4.成纤维细胞接受不同程度电刺激后各蛋白的表达结果1)hes1、notch1、collagen Ⅰ及collagen Ⅲ的表达均随着电刺激频率的增加表现为先上升后降低的趋势。2)collagen Ⅰ及collagen Ⅲ降低的程度比hes1、notch1更为明显。5.雌激素刺激对Notch1通路抑制后成纤维细胞中各蛋白的表达结果1)仅在雌激素浓度为10-8mol/L时,hes1和notch1的表达较抑制组增高,但与对照组比较无明显改变。2)在雌激素浓度为10-8mol/L和10-9mol/L时,collagen Ⅰ的表达较抑制组增高,但这两组之间及其与对照组比较差异不明显。3)collagen Ⅲ的表达在雌激素浓度为10-9mol/L时改变不明显,但随着雌激素浓度升高,其表达逐渐升高。结论:1.Notch信号通路受抑制可能参与了POP的发生发展过程。2.通过干预Notch信号通路可影响人骶韧带成纤维细胞中collagen Ⅰ及collagen Ⅲ的代谢;适当激活该通路可促进collagen Ⅰ及collagen Ⅲ的产生,过度激活反而可抑制collagen Ⅰ及collagen Ⅲ的产生。3.不同程度的电刺激可影响人骶韧带成纤维细胞分泌collagen Ⅰ,collagen Ⅲ的改变,其作用机制可能与Notch信号通路有关。4.一定浓度的雌激素可以缓解DAPT对Notch通路的抑制作用,也可以提高成纤维细胞中collagen Ⅰ及collagen Ⅲ的表达,但Notch信号通路可能不是雌激素提高collagen Ⅰ和collagen Ⅲ的唯一通路。