树鼩在东南亚各国及中国西南地区资源丰富,在遗传上是介于小鼠和猕猴之间的小型哺乳动物,曾一度在分类学上归类为低等灵长类。树鼩在免疫学、病毒学、肿瘤学等方面均与人非常相似,并且具有体型小、生殖周期短、饲养成本低等优势,是理想的实验动物。然而,树鼩在生物医学研究中并未得到广泛的应用,遗传操作手段的缺乏是制约树鼩广泛应用的重要原因之一。最早使用也是比较常用的慢病毒感染法也是效率比较高的遗传操作方法。为了进行转基因树鼩的研究,我们将对不同的慢病毒载体进行改造和筛选,希望能够找到一个高感染效率高表达外源基因的慢病毒载体。本文通过分子克隆以及慢病毒包装等手段,构建出多种慢病毒表达载体,得到多种慢病毒。最后通过筛选出来的慢病毒成功感染树鼩精原干细胞,具有高感染效率以及高表达效率。主要内容如下：1.通过高保真PCR反应获得EFla启动子和PGK启动子的基因片段,通过连接反应构建不同启动子的克隆载体。经过测序验证后,进行双酶切和连接实验成功得到新的慢病毒表达质粒pTomo-EF1a、SIV-EF1a以及SIV-PGK。2.对慢病毒表达质粒进行扩增,并利用不同的转染试剂对不同的慢病毒表达质粒进行慢病毒包装,通过收集和浓缩最后获得多种不同种类的高浓度慢病毒。3.使用不同种类的慢病毒对树鼩原代精原干细胞进行感染测试,其中SIV和SIV-EF1a病毒的感染效率比较高。4.使用筛选出来的慢病毒感染树鼩精原干细胞,并获得转基因的树鼩精原干细胞。5.利用转基因树鼩精原干细胞获得转基因的树鼩,证明慢病毒载体的高表达效率。