【摘 要】
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仔猪断奶可能会增加感染革兰氏阴性病原体的风险,革兰氏阴性病原体可以产生许多毒力因子,包括内毒素脂多糖,但是在畜牧业中禁止使用抗生素。碱性磷酸酶（AKP）是一种非特异性的磷酸单酯酶,它可影响哺乳动物肠道健康,包括预防和减少肠道炎症和细菌易位、解毒局部和全身的肠道内毒素从而起到抗炎作用等功能,可将AKP制成添加酶制剂作为绿色饲料添加剂。本论文通过诱导筛选发现源于大肠杆菌Pho A酶活增加约2.5倍;通
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仔猪断奶可能会增加感染革兰氏阴性病原体的风险,革兰氏阴性病原体可以产生许多毒力因子,包括内毒素脂多糖,但是在畜牧业中禁止使用抗生素。碱性磷酸酶（AKP）是一种非特异性的磷酸单酯酶,它可影响哺乳动物肠道健康,包括预防和减少肠道炎症和细菌易位、解毒局部和全身的肠道内毒素从而起到抗炎作用等功能,可将AKP制成添加酶制剂作为绿色饲料添加剂。本论文通过诱导筛选发现源于大肠杆菌Pho A酶活增加约2.5倍;通过构建异源表达工程菌以增加活性,检测发现B.subtilis中的Pho A活性相较于大肠杆菌中的Pho A提高近10倍;通过基因修饰去信号肽以及定点突变提高活性,实验发现Del Sigpho A相较于Pho A提高5倍;Del Sig D153G-D330N相较于Del Sigpho A酶活高30倍,将稳定系统引入表达质粒中,可显著提高其稳定性。50%（v/v）丙酮沉淀发酵液上清液的碱性磷酸酶蛋白处理IPEC-J2细胞,AKP对转运蛋白基因表达的影响,与对照相比,Del Sigpho A（p=0.276）、Del Sig D153G-D330N（p=0.109）对ASCT2没有显着影响;AKP对紧密连接蛋白基因表达的影响,与对照相比,Del Sigpho A（p=0.002）和Del Sig D153G-D330N（p<0.001）极显着上调了CLDN3;AKP对细胞因子基因表达的影响,Del Sigpho A未显示对IL-6显着影响（p=0.863）,而Del Sig D153G-D330N极显着下调了IL-6（p=0.002）;Del Sigpho A（p=0.457）、Del Sig D153G-D330N（p=0.054）对IL-8无显着影响;Del Sigpho A对TNF-α无明显影响（p=0.336）,而Del Sig D153G-D330N对该基因显着下调（p=0.005）;由此可明显看出Del Sig D153G-D330N对炎症抑制的有益作用。通过大量培育AKP工程菌浓缩酶蛋白作为酶制剂,可增强仔猪免疫力和抗病力,促进动物的生长发育,为生猪产业提供可持续发展动力,带来良好的经济效益,提升人民生活质量。
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