氧化应激在高温诱导的小肠上皮细胞损伤中发挥着重要作用,安石榴苷(PUN)作为石榴皮的有效活性成分之一,具有极强的抗氧化性。本试验采用大鼠肠上皮细胞株(IEC-6)建立体外热应激模型,旨在研究安石榴苷抗高温诱导的IEC-6细胞氧化损伤分子机制。试验一建立IEC-6细胞热应激模型,MTT法检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态学变化,RT-PCR检测热应激蛋白(HSPs) mRNA变化水平,AO/EB检测细胞凋亡状况。结果表明：IEC-6细胞热应激时间为42℃6h,安石榴苷预处理细胞的低、中、高浓度分别为2.5、5、10μM；药物预处理细胞后可以显著缓解热应激造成的细胞损伤,能够显著抑制HSP27、HSP70、HSP90的高表达。试验二DCF法检测细胞内ROS含量,羟胺法检测细胞内SOD活力,TBA法检测细胞内MDA含量。结果表明：安石榴苷预处理细胞后能够显著降低热应激诱导的细胞内ROS、MDA生成,同时显著升高细胞内SOD活力,安石榴苷可以抑制高温诱导的IEC-6细胞氧化应激。试验三western blot检测HO-1、Nrf2及P-AKT蛋白变化水平,免疫荧光检测Nrf2入核情况,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果表明：安石榴苷能够显著促进HO-1的表达、AKT的磷酸化及Nrf2入核,并呈时间和剂量依赖性。然而加入AKT信号通路抑制剂后,P-AKT水平降低、Nrf2入核减少、HO-1表达量降低,同时IEC-6细胞热应激后,安石榴苷细胞保护作用受阻,揭示安石榴苷通过AKT信号通路促进Nrf2入核激活HO-1的表达,从而保护细胞免受氧化应激损伤。