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猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)又称为猪蓝耳病,是现今世界上危害养猪业最重要的疾病之一。猪肺泡巨噬细胞(Porcine alveolar macrophage,PAMs)是猪体内PRRSV感染的重要靶细胞,其可根据内环境的变化而极化为不同的类型,即经典活化的巨噬细胞(M1)及替代活化的巨噬细胞(M2)。为了研究PAMs的极化与PRRSV感染之间的相互影响,我们首先建立了PAMs体外极化模型。通过预冷法分离PAMs并进行体外培养,利用LPS/IFN-γ诱导PAMs极化为M1型巨噬细胞,利用IL-4诱导PAMs极化为M2型巨噬细胞。经Real-time PCR,半定量PCR及Western blot鉴定极化后M1和M2型Marker的表达量变化,结果显示体外诱导后的PAMs分别高表达M1和M2型Marker(M1:TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-12;M2:Arg-1,IL-10,PPARγ),表明体外极化模型的建立成功。然后用500TCID50 PRRSV HuN4株感染极化后不同亚型PAMs,利用间接免疫荧光(IFA),蛋白免疫印迹(Western blot),荧光定量PCR(Real-time PCR)及TCID50分别在12h,24h,36h和48h时测定其感染量,结果显示,病毒感染后12h至36h M1型PAMs中的病毒感染量明显低于正常组(M0)和M2型PAMs(P<0.01),48h后M0、M1及M2型PAMs中病毒的感染量无明显差异,这说明M1型PAMs对PRRSV的复制增殖具有明显的抑制作用,而M2型PAMs对病毒的增殖则无影响。利用Real-time PCR对极化后不同亚型的PAMs中的细胞因子表达量进行测定,结果显示,与M0和M2型PAMs相比M1型PAMs中一些细胞因子及炎性因子如:IFN-α,IL-6,TNF-α,IFIT3(干扰素诱导的三角形四肽蛋白3)及HO-1(血红素氧合酶1)等的表达量明显增加(P<0.01),说明极化为M1型的PAMs产生的的这些炎性因子对病毒的复制增殖产生抑制作用。为进一步探究PRRSV感染对PAMs极化方向的影响,利用Real-time PCR分别检测PRRSV感染后PAMs中M1和M2型Marker表达量的变化。结果显示,PRRSV感染PAMs6h后M2型Marker表达量逐渐增加并在48h时达到最高值,而M1型Marker表达量并无明显的变化,表明PRRSV感染PAMs后PAMs主要朝着M2型方向极化。综上所述,本研究成功的建立了PAMs体外极化模型,并证明极化后的M1型PAMs对于PRRSV的复制增殖具有明显抑制作用,同时PAMs在感染PRRSV后朝着M2型的方向进行极化。本研究为进一步探索PRRSV与其靶细胞PAMs之间的关系提供了一定的理论依据。