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核转录因子E47是E2A基因编码的两个不同碱性螺旋环（basic Helix-Loop-Helix，bHLH）转录因子（E12和E47）之一，亦称Transcription Factor-3（TCF-3）。E47通过形成同源或异源二聚体，结合于目的基因上游启动子的顺式作用元件E-box而调节基因表达。课题组前期利用转录因子活性谱芯片发现，原代培养的新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia reperfusion，H/R）后可引起核转录因子E47活性明显上调。文献报道，E47通过与上皮间质转型（epithelial mesenchymal transition，EMT）密切相关的两个基因——钙黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（αsmooth muscle actin,α-SMA）的上游启动子的E-box顺式作用元件结合，上调α-SMA的表达，并下调E-cadherin的表达，促使上皮细胞表型发生变化，而失去上皮细胞特征和获得肌纤维母细胞样表性。为此，E47在心肌细胞H/R过程中活性增高，是否也会诱导心肌细胞中α-SMA的表达变化，使心肌细胞获得肌纤维母细胞样表型呢？ 目的： 初步探讨心肌细胞缺氧复氧后核转录因子E47与α-SMA的关系。 方法： 1.采用差速贴壁法体外培养Sprague-Dawly大鼠新生乳鼠原代心肌细胞及H9c2大鼠心肌细胞株。 2. Real-time PCR检测心肌细胞缺氧/复氧（H/R）后E47和α-SMA mRNA的表达水平的变化。 3. Western-blot测定心肌细胞缺氧/复氧（H/R）后E47、α-SMA的蛋白表达水平的变化。 4.免疫荧光法观察H/R前后E47和α-SMA在细胞中的表达定位及变化。 5.利用电泳迁移率实验（Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA）在E47表达最高时间点检测其与α-SMA启动子E-box序列的结合活性。 结果： 1. E47蛋白及mRNA的表达水平在原代心肌细胞和H9c2细胞 H/R后均出现表达增高现象，以H3h/R2h时间点表达最高，此后随着复氧时间的延长E47表达逐渐降低。 2.α-SMA蛋白及mRNA的表达水平在原代心肌细胞和H9c2细胞 H/R后均未出现明显变化。 3.免疫荧光结果显示，E47在细胞质和核内均有表达，H3h/R2h后在细胞质及核内的表均有所上升；而α-SMA则主要在细胞质中表达，且H3h/R2h后并无明显变化。 4. EMSA结果显示，E47与DNA有结合活性，且在H3h/R2h后有显著性升高；但与包含α-SMA启动子序列的E-box序列没有结合活性。 结论： 在心肌细胞中，H/R诱导核转录因子E47的短时性表达增高并不能引起α-SMA表达水平的变化。