【摘 要】
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目的:本实验通过q-PCR,Western blot等方法,探究加味丹玄口康对槟榔提取物(ANE)刺激下的大鼠口腔黏膜上皮细胞的作用效果,以及对Axin、β-catenin表达水平的影响。方法:1.将15只SD大鼠随机分为3组,A组:蒸馏水,B组:加味丹玄口康低剂量组,C组:加味丹玄口康高剂量组,每组各5只。A、B、C组分别灌胃生理盐水、低剂量加味丹玄口康、高剂量加味丹玄口康1周后,处死大鼠,采集
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目的:本实验通过q-PCR,Western blot等方法,探究加味丹玄口康对槟榔提取物(ANE)刺激下的大鼠口腔黏膜上皮细胞的作用效果,以及对Axin、β-catenin表达水平的影响。方法:1.将15只SD大鼠随机分为3组,A组:蒸馏水,B组:加味丹玄口康低剂量组,C组:加味丹玄口康高剂量组,每组各5只。A、B、C组分别灌胃生理盐水、低剂量加味丹玄口康、高剂量加味丹玄口康1周后,处死大鼠,采集大鼠药物血清。2.从赛百慷公司购买大鼠口腔黏膜上皮细胞,经过传代培养,镜下观察细胞铺平率达80%时,用胰蛋白酶分解成细胞悬液并将细胞分为4组:A组正常大鼠口腔黏膜上皮细胞+2%上皮细胞完全培养液、B组50ug/ml ANE诱导的大鼠口腔黏膜上皮细胞+蒸馏水药物血清+2%上皮细胞完全培养液、C组50ug/ml ANE诱导的大鼠口腔黏膜上皮细胞+低剂量加味丹玄口康药物血清+2%上皮细胞完全培养液、D组50ug/ml ANE诱导的大鼠口腔黏膜上皮细胞+高剂量加味丹玄口康药物血清+2%上皮细胞完全培养液,ANE诱导24h后观察各组上皮细胞的形态,运用q-PCR、western blot等方法检测上皮细胞中Axin、β-catenin m RNA以及蛋白的表达。结果:(1)经检测,ANE刺激的大鼠口腔黏膜上皮细胞较正常大鼠上皮细胞细胞间桥稀疏、消失,异常核分裂象增加,细胞密度下降,差异有统计学意义(P<0.05);用加味丹玄口康干预的大鼠上皮细胞中细胞连接较紧密,异常核分裂象减少,细胞密度增加(P<0.05),且加味丹玄口康高剂量组上皮细胞密度高于低剂量组。(2)q-PCR、WB结果显示:加味丹玄口康高、低剂量组Axin m RNA、蛋白表达明显高于ANE组,β-catenin蛋白表达明显低于ANE组,存在显著差异(P<0.05)且丹玄口康高剂量组β-catenin蛋白表达最低。结论:1、50ug/ml ANE能够促进大鼠口腔黏膜上皮细胞凋亡,细胞间桥稀疏、消失,诱导正常细胞异常核分裂象。加味丹玄口康可以抑制上皮细胞凋亡,减少核分裂象,改善OSF癌变症状。2.Axin在50ug/ml ANE诱导的大鼠口腔黏膜上皮细胞中呈现低表达,β-catenin在ANE诱导的大鼠上皮细胞中呈现高表达,提示Axin、β-catenin与OSF癌变发生有关,加味丹玄口康可增强Axin在ANE诱导的大鼠上皮细胞中的表达,降低β-catenin表达的量,且与剂量相关,剂量越高,Axin表达越强,β-catenin表达的量越少。
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