Schizosaccharomyces pombe cdc2基因在产能微藻中的克隆与表达

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:logan_lxh
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本论文主要利用微生物分子生物学和基因工程等方法研究Schizosaccharomyces pombe cdc2(粟酒裂殖酵母cdc2)基因在能源微藻中的克隆与表达,将含油量高但生长速度慢的能源微藻进行基因工程改造,以期获得含油量高、生长速度快的工程藻种,为工程微藻的构建提供了一定的实验依据和理论基础。本论文利用石英砂破胞提取法、裂解液提取法和酵母基因组DNA提取试剂盒法提取S. pombe基因组DNA,通过对比发现采用酵母基因组DNA提取试剂盒法提取的S. pombe基因组DNA质量最佳。通过利用PCR技术,从S.pombe基因组DNA中克隆得到全长1189bp的cdc2基因,确定了合适的扩增条件。将得到的S. pombe cdc2基因与NCBI网站上报道的Spombe cdc2基因进行BLAST序列比对,其最大同源性为97%。将所得的S.pombe cdc2基因与表达载体pBI121连接,构建重组表达载体pBI121-cdc2,使用电转化法将重组载体导入舟形藻细胞中,构建舟形藻工程微藻,进行PCR验证后,可得到目的基因。绘制得到的舟形藻工程微藻和未转化的野生型舟形藻的生长曲线,转基因成功后的舟形藻工程微藻生长速度明显提高,培养15天后,细胞密度为3648274个/mL,野生型舟形藻细胞密度为1832274个/mL,舟形藻工程微藻生长速度约为野生型舟形藻的2倍。同时其单位时间产油量提高2倍。
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