背景:在神经退行性疾病中,阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是其最常见的疾病之一。细胞外的β-淀粉样蛋白的沉积,细胞内神经原纤维缠结的形成,以及突触和神经元数量的减少是其主要的病理特征,而就目前来说,其中的β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)的沉积在AD的发病机制中起主导性的作用。阿尔茨海默病的患者随着年龄的增加,会渐进性的表现出轻度的认知功能的障碍,以及记忆力和学习能力的下降等,而在疾病晚期,患者的大脑会发生严重的萎缩,失去独立生活的能力。溶酶体是细胞内重要的细胞器,其主要功能为:对细胞内的小分子物质及成分进行降解,转导信号,细胞分泌和进行能量代谢等。溶酶体本身含有多种水解酶,它们可产生较小的功能性蛋白质,通过清除可能引起疾病受损的细胞器或聚集的蛋白与神经退行性疾病密切相关。转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)是自噬和溶酶体生物合成的主要调节因子,通过调节自噬-溶酶体途径参与AD的发病机制。咪达唑仑是一种常用的静脉麻醉剂,广泛用于临床镇静和手术期间的全身麻醉。迄今为止,很少有人研究在神经退行性疾病患者在手术过程中,麻醉剂的选择以及评估这些麻醉药对患者的效果和潜在机制。实验方法:在这项研究中,使用的是过表达APP(Amyloid precursor protein)的HEK293-APP细胞,转染了TFEB绿色荧光的EGFP-TFEB/HeLa细胞和HeLa细胞。实验中咪达唑仑处理细胞后,然后用溶酶体染色剂对溶酶体进行染色,并在荧光显微镜下观察它们的形态和大小。使用imagj j软件分析溶酶体的数量和大小。通过核质分离和Western免疫印迹检测细胞核中TFEB蛋白和细胞内APP裂解蛋白CTFα和CTFβ的水平,通过共定位检测细胞核内外TFEB的表达情况。最后,应用ELISA法分别检测药物处理后细胞内Aβ40和Aβ42的含量。结果:研究发现在HEK293和HeLa细胞中,30μM咪达唑仑可使溶酶体数量减少,但是细胞的体积增大。然而,15μM咪达唑仑在24小时可以瞬时扰乱溶酶体内稳态,并在36小时恢复。值得注意的是,24小时不同浓度的咪达唑仑处理组之间溶酶体稳态受到干扰的程度没有显着差异。此外,30μM咪达唑仑可阻止TFEB在正常或饥饿细胞中转运至细胞核。最后,在30μM咪达唑仑处理的HKE293-APP细胞中,细胞内CTFβ,CTFα,Aβ40和Aβ42水平均显著升高。结论:总体而言,TFEB向细胞核转运的抑制作用可能与咪达唑仑干扰的溶酶体内稳态及其诱导的体外β-淀粉样蛋白积累有关。结果表明咪达唑仑可以加速AD发病的风险,并提示TFEB可能是降低咪达唑仑依赖性神经毒性的候选靶点。