论文部分内容阅读
目的检测GCF2的5个选择剪切区在正常肝细胞株/组织/肝癌细胞株/组织和卵巢癌细胞株中的表达情况，旨在初步探索GCF2选择性剪切在肝癌发生发展中的可能作用。方法根据Genbank数据库人GCF2的6种不同转录本，预测GCF2基因存在5个选择性剪接区（D1～D5）；针对D1-D5的序列特征设计并合成5对引物，采用RT-PCR技术检测D1～D5分别在正常肝细胞株、肝癌细胞株及人卵巢癌细胞株以及43例肝癌/癌旁组织、9例正常肝组织的表达情况，并对PCR阳性产物进行DNA测序，依据测序结果通过生物信息学预测GCF2选择性剪接区mRNA的二级结构。结果（1）GCF2的4个选择性剪接区（D1～D4）在所检测的9种正常或肿瘤细胞株中均不表达，选择性剪切区D5在肿瘤细胞株和人T淋巴细胞株中呈阳性表达；（2）D2～D4在肝癌、癌旁和正常肝组织中均不表达，D1在肝癌组织和正常肝组织中均表达，D5在41例肝癌/癌旁组织中表达，在2例肝癌/癌旁组织及9例正常肝组织中均不表达。（3）在皮肤、回肠、结肠、扁桃体、子宫颈、阑尾、子宫、甲状腺、肾、肌肉、腹直肌、卵巢、脂肪、4例正常脑组织和5例胶质瘤组织中D1和D42个选择性剪接区均不表达；D2选择性剪接区中回肠、结肠和子宫表达，表达其余组织不表达；D3选择性剪接区中回肠、结肠、子宫甲状腺、肾、卵巢表达，其余组织不表达；选择性剪接区D5在皮肤、回肠、结肠、阑尾、肾中表达，在4例正常脑组织中有3例表达，5例胶质瘤组织中有4例表达；而在扁桃体、子宫颈、子宫、甲状腺、肌肉、腹直肌、卵巢、脂肪组织中均不表达。（4）选择性剪接区D1～D5mRNA二级结构原始自由能分别为‐22.0、‐45.0、‐31.7、‐6.4、‐138.2。结论GCF2的4个选择剪切区（D1～D4）与肿瘤的发生发展可能无明显相关；选择性剪切区D5在所检测的肿瘤细胞株、肝癌组织中阳性表达，在D1～D55个选择性剪接区中D5区域的原始自由能最小，其二级结构最稳定；选择性剪接区D1～D4mRNA二级结构均不稳定，其中选择性剪接区D4最不稳定。提示GCF2的选择剪切区D5可能与肝癌等肿瘤的发生发展有关。