新型大分子超声造影剂的制备与性能研究

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超声造影剂能有效提高图像对比度和器官显影度,在超声成像领域被广泛应用。目前,临床上广泛使用的超声造影剂是Sonovue,然而其溶解在生理盐水后形成的微米级气泡尺寸较大,对较细血管和肿瘤组织的造影成像有局限性;同时,Sonovue造影剂功能单一且难以实现功能化;此外,由于Sonovue造影剂的壳材料是磷脂小分子,所以其在体内的循环稳定性也较差。为了解决上述问题,本论文合成了两种不同类型的聚合物,通过聚合物自组装以及声振空化法分别制备得到了两种不同功能的新颖超声造影剂,并分别对其超声造影效果进行了研究。具体研究内容如下:(1)以十六烷基胺和聚乙二醇二缩水甘油醚为单体,通过氨基和环氧点击化学反应制备了一种含有长烷基链的新型交替共聚物P(OEG8-a-C16)。将P(OEG8-a-C16)作为壳材料,以六氟化硫(SF6)为内核气体,制备了一种阳离子超声造影剂微泡,体内外超声造影实验结果表明其具有一定的造影效果,但稳定性较差。在P(OEG8-a-C16)壳材料中添加不同摩尔比的小分子表面活性剂Span60,进一步制备了P(OEG8-a-C16)-Span60微泡,并研究了Span60比例、超声功率、超声时间对微泡浓度和粒径的影响,结果表明壳层中Span60的比例为20%,超声功率为31%(580 W),超声时间为150 s时,得到的微泡浓度最高,可以达到9.0±0.41×108个/m L,平均粒径为2.32μm,满足临床上超声造影剂的基本要求。同时与Sonovue的体内外超声造影效果进行比较,结果显示P(OEG8-a-C16)-Span60微泡的体内外超声信号衰减速度都要慢于Sonovue,表明其具有较长的体内停留时间和稳定性。MTT测试表明该微泡的毒性较小,生物相容性较好。由于P(OEG8-a-C16)聚合物带有正电荷,将FITC标记的血管内皮粘附因子-1(VCAM-1)抗体通过静电吸附法负载在P(OEG8-a-C16)-Span60微泡表面制备了具有能靶向到炎症部位的荧光/靶向超声造影剂微泡,并探究了其靶向成像、超声/荧光双模式成像效果。VCAM-1抗体负载率约为3.6μg VCAM-1抗体/108个微泡。在兔颈动脉炎症斑块中的造影结果表明,负载了VCAM-1抗体的P(OEG8-a-C16)-Span60微泡对炎症斑块具有靶向性,相较于非靶向微泡在炎症部位聚集得更快,且造影强度有明显的差异,表明其可以用于炎症斑块的诊断。同时,小动物活体成像结果表明其亦能进行荧光活体成像,展示出多功能合一的特性。(2)通过阳离子开环聚合制备了一系列不同PEO臂长的两亲性超支化多臂共聚物HBPO-star-PEO,以其作为壳材料、SF6为内核气体制备了纳米级超声造影剂微泡。实验发现随着PEO链的增长,微泡的稳定性逐渐增加,浓度也逐渐增加,10臂长的HBPO-star-PEO制备得到的微泡平均粒径为517.3 nm,SF6浓度为9.12μL/m L,微泡体外超声时间可达到30 min。兔耳缘静脉注射造影剂后,可在兔心脏内观察到造影剂的有效灌注,心脏显影效果十分显著。由于该造影剂微泡的尺寸较小,与微米级的Sonovue造影剂相比具有尺寸上的优势。通过尾静脉注射来研究了他们在荷瘤小鼠体内的超声造影效果,结果显示Sonovue造影剂不能在肿瘤部位造影,而通过HBPO-star-PEO制备得到的造影剂有少部分到达肿瘤部位。同时,在HBPO-star-PEO制备得到的造影剂中包覆了尼罗红荧光染料,并通过激光共聚焦显微镜以及小动物活体成像研究其体内外荧光成像性能,结果显示其能有效地包覆荧光探针,同时还能实现小动物荧光活体成像。证明纳米级的HBPO-star-PEO超声造影剂在肿瘤超声成像和治疗中具有应用潜力。
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