随着生物科学技术的不断发展,微生物转化逐渐应用于天然产物的研究和生产中。传统的生物转化反应在水相中进行,而黄酮化合物芦丁在中性水介质中的溶解度极低,受到可利用底物的限制,但是芦丁易溶于碱性溶液。目前研究得到的可以转化芦丁生成异槲皮素的微生物多数为真菌,也有放线菌,且多数编码胞外酶,除了α-L-鼠李糖苷酶活性外还有β-葡萄糖苷酶活性。本论文旨在利用微生物转化法对底物芦丁进行水解,从而生物合成异槲皮素。通过诱变育种筛选耐高温、耐碱的高效转化菌株;优化高效突变株的转化条件,建立高效突变株的最佳转化条件,为生物转化法合成异槲皮素提供一条行之有效的途径。因为芦丁在室温、中性水溶液中溶解度低,为了增大底物芦丁的溶解度,对本实验室筛选得到的能够降解芦丁生成异槲皮素的岸滨芽孢杆菌(Bacillus litoralis)C44进行诱变育种,筛选耐碱、耐高温的高效转化突变菌株。紫外线诱变的最适诱变时间为50 s,得到196株p H9.0,37℃长势良好的突变株,经过TLC进行复筛得到16株具有α-L-鼠李糖苷酶活性的菌株。并用Quantity One软件对数据进行处理,得到数据。其中UV-2-45菌株相对原始菌株C44的转化率为143.3%,利用HPLC进行检测得到UV-2-45菌株相对原始菌株C44的转化效率为147.1%。为进一步提高转化效率,对UV-2-45的转化条件进行了进一步优化,结果表明利用静息细胞在p H为9.0,温度为32℃、底物浓度为3.0 mg/m L、甲醇浓度为60μL/m L、转化时间为48 h、司班80浓度为20μL/m L的转化条件下,用Quantity One软件对数据进行处理,得出优化后UV-2-45菌株比优化前相对转化率提高了28.1%,用HPLC检测得到优化后的UV-2-45菌株比优化前的相对转化效率提高了48%,相对出发菌株C44的转化效率提高了117.1%。通过硅胶柱色谱进行分离、根据蛋白/核酸分析仪扫描结果合并组分,利用ma Vic真空浓缩仪在混合模式、35℃下浓缩10 h左右至干燥,称重计算异槲皮素得率为42.6%。HPLC对转化产物异槲皮素进行纯度检测,纯度达到98.45%。