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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是严重危害养猪业的猪烈性传染病之一。2006年,我国暴发高致病性猪猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS),以高热、高发病率和高死亡率为特征,给我国养猪业造成了巨大经济损失。目前,用于防控PRRSV的疫苗株都是在MARC-145细胞上传代致弱。近年来,PRRSV变异速度加快,出现了许多不能在MARC-145细胞上传代的PRRS毒株。针对这类PRRS变异株的研究对于我国预防该类PRRS毒株的流行具有重要意义。PRRSV Henan-A11-376株,可以感染PAM细胞,但是不能感染MARC-145细胞。而PRRSV HuN4-F112株是高度适应MARC-145细胞的疫苗株。本研究以pHuN4-F112株和p376的感染性克隆质粒为骨架,利用反向遗传技术互换ORF1a、ORF1b和ORF2-7基因区域,成功构建了6个嵌合质粒,并拯救出5株嵌合病毒r HuN4-F112-TORF1a、rHuN4-F112-TORF1b、rHuN4-F112-TORF2-7、r376-TORF1a和r376-TORF2-7。结果表明ORF1a和ORF2-7对于PRRSV感染MARC-145细胞的差异起关键作用,ORF1b对PRRSV感染MARC-145细胞的差异所起作用较小。为了确定ORF1a基因区编码的非结构蛋白对PRRSV感染MARC-145细胞差异的影响,互换NSP1、NSP2和NSP3-8基因区域,成功构建了6个嵌合质粒,并拯救出3株嵌合病毒rHuN4-F112-TNSP1、rHuN4-F112-TNSP2和rHuN4-F112-TNSP3-8。结果表明NSP1、NSP2和NSP3-8单独任何一段基因区域对PRRSV感染MARC-145细胞的差异不起作用。为了确定ORF2-7基因区编码的结构蛋白对PRRSV感染MARC-145细胞差异的影响,互换ORF2-4和ORF5-7基因区域,成功构建了4个嵌合质粒,并拯救出2株嵌合病毒rHuN4-F112-TORF5-7和r376-TORF2-4。结果表明ORF2-4对PRRSV感染MARC-145细胞的差异起关键作用,ORF5-7不起作用。为了确定ORF2-4基因区编码的次要结构蛋白对PRRSV感染MARC-145细胞差异的影响,互换编码GP2a胞外域、GP3胞外域及GP4蛋白的基因区域,成功构建了6个嵌合质粒,并拯救出1株嵌合病毒rHuN4-F112-TORF4。结果表明编码GP2a胞外域和GP3胞外域的单独任何一个基因区域影响了HuN4-F112对MARC-145细胞的感染,但是对Henan-A11-376不能感染MARC-145细胞没有影响。编码GP4蛋白的基因区域对PRRSV感染MARC-145细胞的差异不起作用。为了确定ORF2-4编码的次要结构蛋白的协同作用对PRRSV感染MARC-145细胞差异的影响,互换编码GP3胞外域和GP2a的基因区、编码GP2a胞外域和GP4的基因区及编码GP3和GP4的基因区,成功构建了6个嵌合质粒,并拯救出4株嵌合病毒rHuN4-F112-TORF2a-ORF3、rHuN4-F112-TORF3-ORF4、r376-TORF2a-ORF3和r376-TORF2a-ORF4。结果表明编码GP3胞外域和GP2a的基因区、编码GP2a胞外域和GP4的基因区是导致PRRSV感染MARC-145细胞差异的最关键基因区域。本研究确定了ORF1a是引起PRRSV感染MARC-145细胞差异的主要基因区域之一,而且编码GP3胞外域和GP2a的基因区、编码GP2a胞外域和GP4的基因区是导致PRRSV感染MARC-145细胞差异的最关键基因区域。本研究对于不能感染MARC-145细胞的PRRSV疫苗株驯化提供了新的研究思路和方法。