第一部分 "彗星"分析法检测实体肿瘤放射敏感性的方法学完善 目的：改进和完善改良“Comet”分析法以更好地用于实体肿瘤的放射敏感性检测。 材料与方法：门诊活检标本制成单细胞悬液，冰上照射后立即铺胶制板，在裂解液中裂解50分钟，漂洗后进行细胞电泳(20分钟)。PI染色后在荧光显微镜下采图并用专用软件进行图像分析。每例样品均设对照样(包括外参对照和自身对照)和照射样(照射剂量为5Gy)，并对活检样品的正常细胞和肿瘤细胞进行分类采图。观察指标为细胞DNA含量和尾力矩。 结果：实验结果显示，影响实验室测定结果与临床肿瘤放射反应相关性的因素主要有：1)取材问题，因取材较表浅样品中仅有淋巴细胞没有肿瘤细胞，从而导致实验室测定结果与临床肿瘤放射敏感性的吻合性下降。2)样品中坏死细胞较多，使本底增高，“本底”是影响放射敏感性分析的重要因素。3)增设淋巴瘤细胞作为外参对照可以对实验过程的系统误差进行校正，是质量控制不可缺少的环节。4)对活检样品中的正常细胞和肿瘤细胞进行分类采图对提高临床与实验室检测结果的吻合性很有帮助。5)采图时间会对TM的测量结果造成影响，制片后即刻采图的TM测量结果好于次日采图；无论即刻还是次日采图，不同采图者之间测量差异不大。 结论：在实验中同时设置内、外参对照并对样品中的肿瘤细胞和正常细胞进行分类采图以及制片后即刻采图，对有效提高实验室检测结果与临床肿瘤实际放射反应的吻合性很有帮助。 第二部分 辐射诱导的人鼻咽癌细胞和脑胶质瘤细胞DNA损伤及修复 目的：研究和探讨辐射诱导的人鼻咽癌细胞(CNE—1)和脑胶质瘤细胞(BT325) DNA损伤及修复与放射敏感性的关系。 材料与方法：采用人鼻咽高分化鳞状上皮癌细胞和脑胶质瘤细胞作为实验对象。采用碱性“Comet”分析法，检测不同细胞的放射敏感性差异及放射损伤修复能力。以尾力矩(Tail Moment，TM)作为细胞DNA损伤的定量评价指标，检测细胞照射后的初始DNA损伤(DNA单链断裂)和损伤后的修复能力及DNA损伤半修复时间。同时用经典的细胞克隆形成方法绘制细胞放射存活曲线，作为评价放射敏感性的参照，并对“Comet”分析法和克隆形成方法所测结果进行比较。 结果：①CNE—1和BT325细胞DNA单链断裂：两种细胞对照组的TM值均很小，无显著性差异(P>0.01)。随着照射剂量增加，在相同实验条件下，CNE—1细胞的初始损伤大于BT325细胞，差异有显著性(P<0.01)，表明CNE—1细胞的放射敏感性高于BT325细胞。②辐射诱导的CNE—1和BT325细胞DNA损伤修复：“Comet”分析法检测BT325细胞DNA损伤的半修复时间为11.1min，明显小于CNE—1细胞的半修复时间41.8min，提示BT325细胞对DNA放射损伤的修复能力大于CNE—1细胞。③CNE—1和BT325细胞放射敏感性：CNE—1和BT325细胞的D0值、SF2分别为1.23 vs0.6和1.36 vs0.74，表明CNE—1细胞的放射敏感性高于BT325细胞。CNE—1和BT325细胞的Dq值分别为1.76和2.21，表明BT325细胞的亚致死损伤修复能力大于CNE—1细胞。 结论：研究结果显示在相同剂量照射后CNE—1细胞的初始DNA损伤水平明显大于BT325细胞；随着照射后时间的推移，两种细胞对DNA放射损伤的修复能力也明显不同，BT325细胞对X射线照射后的初始DNA损伤修复明显快于CNE—1细胞。结果提示，CNE—1细胞和BT325细胞的DNA损伤以及修复能力不同可能是导致细胞内在放射敏感性不同的主要机制之一。