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帕金森病(parkinsons disease，PD)是一种常见的中枢神经系统退行性病变，其典型病变是在黑质致密部、蓝斑神经元，上述部位多巴胺(dopamine，DA)能神经元出现变性、凋亡、缺失。脑肾素-血管紧张素系统(RAS)在调节神经炎症反应和多巴胺能(DA)神经元退行性病变的进展中起重要作用。血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)通过血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)诱导小胶质细胞活化介导的神经炎症与PD的病程有密切的关系，从而影响DA能神经元的功能。EndophilinA2(EP2)参与快速内皮素介导的胞吞作用(FEME)并迅速内吞几种G蛋白偶联受体(GPCR)，而AT1R属于GPCR家族，因此，EP2可能通过内吞AT1R调节小胶质细胞激活。鸡豆黄素A(biochanin A, Bioch A)是一种异黄酮类植物雌激素，课题组前期研究表明BiochA可以抑制由于LPS诱导的小胶质细胞发生的活化，但AngII诱导的小胶质细胞发生激活，进而引起DA能神经元的凋亡，其作用还不明确。
目的：研究BiochA对AngⅡ诱导的DA能神经元损伤的改善作用及其机制。
方法：采用随机分组法将SD大鼠分成以下6组：假手术组、AngⅡ(5μg/3μl)模型组、Losartan对照组和鸡豆黄素A不同浓度给药组(AngⅡ+BiochA(16mg/kg)、AngⅡ+BiochA(32mg/kg)、AngⅡ+BiochA(64mg/kg))。用脑部立体定位仪精准定位在大鼠大脑黑质致密部处，注射AngⅡ引发DA能神经元的损伤状态从而制备模型，假手术组注射等体积生理盐水。注射后24h苏醒，BiochA组按相应浓度梯度灌胃给药，Losartan组也灌胃给药。注射后第7天，各组大鼠开始观察各行为学指标的改变。接着，各组大鼠腹腔注射阿朴吗啡，检测并记录旋转圈数，实验结束后立即断头处死，取组织待检。采用免疫组织化学法(IHC-P)，观察小胶质细胞的活化和DA能神经元的状态，Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3，NLRP3)、EndophilinA2(EP2)。采用免疫蛋白印迹法(western blot)，检测大脑黑质致密部α-突触蛋白(α-synuclein)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase-1，Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-likeprotein containing CARD，ASC)、gp91phox、p22phox、IL-1β(interleukin1β，L-1β)、IL-6(interleukin-6)、IL-18(interleukin-18，IL-18)、TNF-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)表达情况。
结果：
1)对模型大鼠行为学影响结果：与假手术组相比，AngⅡ组大鼠的自由活动能力出现不同程度降低；与AngⅡ组相比，BiochA组大鼠的自发活动及探索行为均有不同程度提高。
2)诱导旋转结果：AngⅡ组大鼠腹腔注射阿扑吗啡出现向健康侧旋转的现象，且BiochA组旋转次数少于AngⅡ组。
3)对模型大鼠病理学影响：假手术组大鼠黑质致密部中DA能神经元饱满且数目多，小胶质细胞数量较少且大多数处于沉默状态；而AngⅡ组，DA能神经元大多形态发生变化最后凋亡、缺失，胞体萎缩，同时小胶质细胞激活明显增多，呈“阿米巴样”；与AngⅡ组相比，BiochA组减少了小胶质细胞活化数量和降低DA能神经元损伤程度。
4)对模型大鼠NLRP3炎症小体影响：AngⅡ组NLRP3蛋白表达升高，而BiochA组降低了NLRP3表达量；Westernblot观察结果：AngⅡ组Caspase-1和ASC蛋白表达量升高，BiochA组显著降低Caspase-1和ASC蛋白表达水平。
5)对模型大鼠氧化亚基的影响：AngⅡ组gp91phox和p22phox表达量升高，但BiochA组降低了gp91phox和p22phox表达量。
6)对模型大鼠炎症因子的影响：AngⅡ组IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α表达量升高，BiochA组降低IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α。
7)对模型大鼠吞蛋白和AT1R的影响：AngⅡ组EP2表达降低，AT1R表达升高，但BiochA组促进EP2蛋白表达，降低AT1R表达水平。
结论：
BiochA对AngⅡ诱导的DA能神经元损伤模型大鼠具有保护作用，其机制可能与BiochA抑制AngII诱导小胶质细胞的活化，通过抑制NADPH氧化酶和NLRP3炎症小体的活性，其进一步机制可能与EP2和AT1R之间的相互作用有关。
目的：研究BiochA对AngⅡ诱导的DA能神经元损伤的改善作用及其机制。
方法：采用随机分组法将SD大鼠分成以下6组：假手术组、AngⅡ(5μg/3μl)模型组、Losartan对照组和鸡豆黄素A不同浓度给药组(AngⅡ+BiochA(16mg/kg)、AngⅡ+BiochA(32mg/kg)、AngⅡ+BiochA(64mg/kg))。用脑部立体定位仪精准定位在大鼠大脑黑质致密部处，注射AngⅡ引发DA能神经元的损伤状态从而制备模型，假手术组注射等体积生理盐水。注射后24h苏醒，BiochA组按相应浓度梯度灌胃给药，Losartan组也灌胃给药。注射后第7天，各组大鼠开始观察各行为学指标的改变。接着，各组大鼠腹腔注射阿朴吗啡，检测并记录旋转圈数，实验结束后立即断头处死，取组织待检。采用免疫组织化学法(IHC-P)，观察小胶质细胞的活化和DA能神经元的状态，Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3，NLRP3)、EndophilinA2(EP2)。采用免疫蛋白印迹法(western blot)，检测大脑黑质致密部α-突触蛋白(α-synuclein)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase-1，Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-likeprotein containing CARD，ASC)、gp91phox、p22phox、IL-1β(interleukin1β，L-1β)、IL-6(interleukin-6)、IL-18(interleukin-18，IL-18)、TNF-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)表达情况。
结果：
1)对模型大鼠行为学影响结果：与假手术组相比，AngⅡ组大鼠的自由活动能力出现不同程度降低；与AngⅡ组相比，BiochA组大鼠的自发活动及探索行为均有不同程度提高。
2)诱导旋转结果：AngⅡ组大鼠腹腔注射阿扑吗啡出现向健康侧旋转的现象，且BiochA组旋转次数少于AngⅡ组。
3)对模型大鼠病理学影响：假手术组大鼠黑质致密部中DA能神经元饱满且数目多，小胶质细胞数量较少且大多数处于沉默状态；而AngⅡ组，DA能神经元大多形态发生变化最后凋亡、缺失，胞体萎缩，同时小胶质细胞激活明显增多，呈“阿米巴样”；与AngⅡ组相比，BiochA组减少了小胶质细胞活化数量和降低DA能神经元损伤程度。
4)对模型大鼠NLRP3炎症小体影响：AngⅡ组NLRP3蛋白表达升高，而BiochA组降低了NLRP3表达量；Westernblot观察结果：AngⅡ组Caspase-1和ASC蛋白表达量升高，BiochA组显著降低Caspase-1和ASC蛋白表达水平。
5)对模型大鼠氧化亚基的影响：AngⅡ组gp91phox和p22phox表达量升高，但BiochA组降低了gp91phox和p22phox表达量。
6)对模型大鼠炎症因子的影响：AngⅡ组IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α表达量升高，BiochA组降低IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α。
7)对模型大鼠吞蛋白和AT1R的影响：AngⅡ组EP2表达降低，AT1R表达升高，但BiochA组促进EP2蛋白表达，降低AT1R表达水平。
结论：
BiochA对AngⅡ诱导的DA能神经元损伤模型大鼠具有保护作用，其机制可能与BiochA抑制AngII诱导小胶质细胞的活化，通过抑制NADPH氧化酶和NLRP3炎症小体的活性，其进一步机制可能与EP2和AT1R之间的相互作用有关。