研究背景及目的:急性T淋巴细胞白血病（T cell Acute Lymphoblastic Leukemia,T-ALL）是一种以异常造血干细胞或早期祖细胞的异常增生和浸润为特征的恶性血液系统肿瘤。在儿童及35岁以内成人的恶性肿瘤中,白血病的死亡率位居第一,而T-ALL的发病率在儿童和成人急性淋巴细胞性白血病中分别占15%和25%,白血病细胞侵袭浸润到特定器官导致疾病复发和预后不良,严重威胁人类健康。因此,研究T-ALL侵袭浸润的分子机制对寻找治疗新靶点具有重要意义。本实验室前期的研究表明,CC趋化因子受体9（CC chemokine receptor 9,CCR9）在T-ALL细胞中高表达,且可特异性地与其唯一受体CC趋化因子配体25（CC chemokine ligand 25,CCL25）结合,参与T-ALL的侵袭浸润,但CCR9的表达调控机制尚不明确。目前,越来越多的研究发现长链非编码RNA（Long non-coding RNA,Lnc RNA）通过调控基因表达在肿瘤的迁移、侵袭和浸润中发挥重要作用。本研究通过生物信息学方法在GEO数据库20个T-ALL相关基因芯片中筛选出与CCR9表达呈负相关的Lnc RNA,旨在探讨此Lnc RNA对CCR9的表达调控及对T-ALL侵袭浸润的作用影响。研究内容及方法:利用生物信息学方法在GEO数据库的T-ALL芯片中寻找出与CCR9的表达呈负相关的Lnc RNA,按照相关性由大到小排序,筛选出LINC00853。在GEO数据集中统计LINC00853和CCR9在T-ALL的表达水平,并进一步采用Real-time PCR检测LINC00853和CCR9在T-ALL临床样本及T-ALL细胞系中的表达水平。以T-ALL细胞系jurkat细胞为对象,设计shrna构建慢病毒LINC00853稳定干扰细胞株,再构建腺病毒LINC00853回补细胞株,利用Real-time PCR,Western Blot和流式细胞术对比干扰组、回补组和对照组中LINC00853与CCR9的表达调控关系。通过Transwell、Matrigel-Transwell实验对比LINC00853干扰组、回补组和对照组中jurkat细胞的迁移、侵袭能力变化。动物实验中,尾静脉注射三组细胞系构建小鼠白血病模型,对比三组小鼠体重增长变化,计算脏体比,流式细胞术检测小鼠肝、脾、脑、肺、肾和卵巢组织细胞中EGFP（转染后jurkat细胞表面分子标志）阳性细胞的比例,再通过荧光显微镜观察组织切片中的jurkat细胞比例,从而验证LINC00853对TALL细胞（jurkat）的侵袭与浸润能力的影响。研究结果:生物信息学筛选出十条Lnc RNA与CCR9的表达呈负相关,按相关性大到小排序,排除前两条同源性序列太多的Lnc RNA,选中LINC00853作后续研究。GEO数据集显示在T-ALL中LINC00853低表达,CCR9高表达,同时Real-time PCR检测出在T-ALL临床样本和T-ALL细胞系中LINC00853下调,CCR9上调与数据库结果一致。Real-time PCR、Western Blot和流式细胞术检测出干扰LINC00853后CCR9的表达水平上调,回补LINC00853发现可恢复CCR9的表达。Transwell和Matrigel-Transwell检测出干扰LINC00853后,用CCL25诱导后的jurkat细胞迁移侵袭能力明显增强,大约提高到对照组的1.5倍,回补LINC00853后,jurkat细胞迁移侵袭能力明显降低,大约降低为对照组的30%。小鼠体内实验结果表明,干扰组小鼠体重增长率最低,回补组基本恢复到对照组水平,干扰组肝、脾、脑、肺、肾和卵巢均明显肿大,回补组与对照组炎症程度相当。流式细胞术和荧光显微镜检测到干扰组小鼠肝、脾、脑、肺、肾和卵巢组织中EGFP（转染后jurkat细胞表面分子标志）阳性细胞的比例为三组最大值,回补组比例与对照组基本相当。提示LINC00853通过调节CCR9的表达进而介导jurkat细胞在小鼠脏器中的浸润。结论:LINC00853可负向调控CCR9的表达,在CCL25的作用下,LINC00853可通过调节CCR9的表达来抑制T-ALL的侵袭和浸润。