转基因鸡在畜牧行业不仅是一种重要的经济动物,而且鸡的输卵管生物反应器是生产药物蛋白的理想生物反应器,转基因鸡的生产具有广阔的应用前景。本研究构建了不同的慢病毒载体,并对慢病毒转基因鸡研究的方法进行了系统的探索,取得如下结果:慢病毒转基因载体的构建:在本研究中构建了过表达的GV358-LV-HL F、pLVX-IRES-LTF-EGFP 和 pCDH-CMV-LTF-mcherry 载体慢病毒载体,三个载体以CMV启动子调控表达HLF和LTF的基因序列,通过本实验室的三质粒包装慢病毒系统分别包装出了高滴度的慢病毒,通过倍比稀释的方法检测出慢病毒滴度达到109TU/mL。不同因素对慢病毒转基因制备效率的探索:本研究探索了不同因素对种蛋孵化率的影响。通过不同封口方式试验结果显示:种蛋石蜡封口,出壳率70%。种蛋封口膜封口,出壳率60%。均低于对照组出壳率100%。不同开口位置对鸡胚孵化率的影响。种蛋钝端开口,孵化率为70%。种蛋赤道面开口,孵化率为50%,均低于对照组孵化率为100%。不同口径的注射器械对鸡胚孵化率的影响。1mL注射器注射种蛋,孵化率为60%。20μL微量注射器注射种蛋,孵化率为60%。40um 口径的显微注射针注射种蛋,孵化率为70%。均低于对照组孵化率100%。赤道面开口注射不同溶液对鸡胚发育的损伤。台盼蓝注射种蛋,孵化率为0%。PBS注射种蛋,孵化率为25%。生理盐水注射种蛋,孵化率为30%。均低于对照组孵化率100%。慢病毒制备转基因鸡:钝端注射不同滴度慢病毒对鸡胚发育的影响。慢病毒滴度108TU/mL注射种蛋,孵化率50%。慢病毒滴度107TU/mL注射种蛋,孵化率50%。慢病毒滴度106TU/mL注射种蛋,孵化率65%。慢病毒滴度105TU/mL注射种蛋,孵化率65%。生理盐水组孵化率70%。赤道面用109TU/mL慢病毒液注射种蛋,出壳数10只,孵化率50%。慢病毒转基因鸡胚胎和鸡的检测:提取血液和组织DNA,PCR检测。钝端注射制备转基因鸡的方法未检测到阳性的转基因鸡。赤道面注射制备转基因鸡的方法在鸡喙、胰腺、脑、肌胃、肺脏、心脏、法氏囊、肾脏检测目的基因的表达。本研究通过赤道面显微注射获得了 G0表达LTF的阳性转基因鸡,为以后转基因鸡的生产提供了参考,为应用慢病毒介导方法生产鸡输卵管生物反应器研究奠定了良好的基础。