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目的:通过基因芯片技术找出角膜上皮干细胞和皮肤上皮干细胞差异性表达的microRNAs并对其在增殖和分化方面的功能及作用机制进行初步的研究和探讨。方法:1.运用克隆培养方法分别培养三组人角膜和皮肤上皮干细胞,进行microRNA基因芯片分析,找出有显著差异性表达的microRNA(p≤0.05差异倍数≥1.5)。2.对基因芯片分析出的差异性表达的microRNA进行荧光实时定量PCR,筛选出表达模式与芯片结果一致并且差异倍数较大的microRNA。3.运用荧光实时定量PCR,研究筛选出来的有显著差异的microRNA在角膜和皮肤上皮干细胞分化过程中的变化。4.利用瞬时转染的方法将在角膜缘干细胞中显著表达上调的miR-145 mimics转染进入皮肤上皮干细胞,用相差显微镜观察细胞形态变化,MTT检测细胞增殖能力的变化。5.用TargetScan及miRanda预测miR-145与增殖相关的靶基因,荧光实时定量PCR和蛋白免疫印迹(Westernblot)研究证实过表达miR-145后其靶基因及靶基因下游基因的变化。结果:1.microRNA基因芯片分析共找出了 27个在角膜上皮干细胞和皮肤上皮干细胞中差异性表达的microRNA;其中在角膜上皮干细胞中表达较高的有17个,为 miR-30a,miR-1297,miR-4301,miR-4262,miR-199aa-3p,miR-190,miR-302f,miR-338-5p,miR-484,miR-21,miR-376b,miR-26a,miR-140-3p,miR-18b,miR-145,miR-652,miR-324-5p;在皮肤上皮干细胞中表达较高的10 个,为 miR-23a*,miR-943,miR-1236,miR-193b*,miR-382,miR-542-3p,miR-205*,miR-224*,miR-378,miRPlus-1382*。2.实时荧光定量PCR验证出与基因芯片结果表达模式一致且差异倍数较大的microRNA 有 8 个(miR-4262,miR-199aa-3p,miR-190,miR-302f,miR-21,miR-376b,miR-140-3p,miR-145),均为在角膜缘上皮干细胞中显著上调表达的 microRNA。3.对角膜和皮肤干细胞分化过程筛选出的8个差异性表达的microRNA变化的分析中发现,其中6个在角膜和皮肤上皮干细胞分化过程中表达均显著降低,而仅miR-302f和miR-4262在角膜上皮干细胞分化过程中显著升高,而在皮肤上皮干细胞分化过程中显著降低。4.选取miR-145进行初步的功能研究,结果表明miR-145可以抑制皮肤上皮干细胞的增殖能力。5.miR-145抑制皮肤上皮干细胞增殖能力的功能是通过下调p38基因的表达从而抑制p38 MAPK信号通路来实现的,同时信号通路下游基因p63的表达也降低。结论:1.差异性表达的microRNA在维持角膜和皮肤上皮干细胞各自的特性中可能起到关键作用。2.差异性表达的microRNA在角膜和皮肤上皮干细胞分化过程中的变化提示其在维持上皮干细胞干性和引导不同上皮干细胞特定分化过程中的重要作用。3.miR-145调控皮肤及角膜上皮细胞的增殖能力,这在对上皮细胞的异常增殖和成瘤的控制中可能起着重要作用。