论文部分内容阅读
【目的】检测RPL36A基因在急性髓系白血病初治病人、正常人单个核细胞、U937细胞的表达情况及其对U937细胞增殖与凋亡的作用。【方法】采用RT-PCR检测急性髓系白血病、正常人单个核细胞、U937细胞RPL36A基因的表达情况;采用人工化学合成的RPL36AsiRNA ,经LipofectamineTM 2000脂质体介导转染入U937细胞,应用四唑盐(MTT)法检测细胞的增殖情况,AO-EB、TUNEL、Annexin V/FITV检测细胞凋亡情况,应用流式细胞术DNA倍体分析细胞周期,RT-PCR和Western blot检测RPL36AsiRNA作用前后RPL36A基因mRNA及蛋白表达水平的变化。【结果】RPL36A在急性髓系白血病初治病人(RPL36A/actin 1.0546±0.22892)与U937细胞(RPL36A/actin 1.1642±0.1112)中表达明显增高,而正常人单个核细胞(RPL36A/actin 0.3227±0.1528)低表达,差异具有显著性意义。RPL36AsiRNA能明显抑制U937细胞增殖,半数抑制浓度IC50约为150nM。(1)MTT法检测转染RPL36AsiRNA的U937细胞组24h、48h、72h、96h吸光度值(A值)分别为0.266±0.027、0.315±0.0102、0.391±0.0099、0.418±0.0142,与对照组比较明显降低,细胞生长抑制率明显增高;(2)AO/EB染色、原位细胞凋亡检测显示转染RPL36AsiRNA的细胞组凋亡率较对照组增高;Annexin V/FITV检测显示转染RPL36AsiRNA作用于U937细胞24h、48h、72h后凋亡率分别为25.31±3.01%、35.78±2.30%、53.25±2.71%;DNA倍体分析检测出转染RPL36AsiRNA的细胞组24h(%G2 +S 34.6±1.8)、48h(%G2 +S 26.8±2.8)、72h(%G2 +S 14.5±3.7)细胞周期变化,提示周期停滞,而对照组细胞无明显变化;(3)RPL36AsiRNA作用后可引起U937细胞的RPL36A的mRNA水平的降低和蛋白表达量下降。【结论】RPL36A基因在急性髓系白血病病人与U937细胞中高表达。RPL36AsiRNA对U937细胞有明显的抑制作用,可抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。RPL36A基因在急性髓系白血病的发生发展中可能起着一定的作用。