论文部分内容阅读
研究目的p53是重要的抑癌基因，其突变或失活与肿瘤的发生发展关系密切，目前认为将具有正常功能的抑癌基因导入肿瘤细胞内，可以恢复突变或失活基因的功能。重组人p53腺病毒(Ad-p53)由腺病毒载体DNA和人p53基因重组而成，可将野生型p53基因导入肿瘤细胞内从而恢复p53的正常功能。他莫昔芬(Tamoxifen，TAM)为雌激素受体调节剂(SERMs)，在雌激素受体阳性的乳腺癌治疗中得到广泛应用。我们通过观察Ad-p53感染乳腺癌细胞系MCF-7后的形态学变化，分析感染后乳腺癌细胞的增殖抑制率、p53蛋白的表达水平和细胞的凋亡情况等，以及分析Ad-p53与他莫昔芬联合使用对上述指标的影响，探讨两者是否具有协同作用，为基础与临床研究乳腺癌治疗的新方法提供理论依据。研究方法1.比较各组细胞的形态学变化:用Ad-p53(50MOI)、Ad-p53(50MOI)与他莫昔芬(5μmol/l)联合作用MCF-7细胞，使用倒置显微镜观察不同处理组细胞的生长情况以及形态学变化。2.比较各组细胞的增殖抑制率:用Ad-p53(50MOI)、他莫昔芬(5μmol/l)、Ad-p53(50MOI)与他莫昔芬(5μmol/l)联合作用MCF-7细胞，观察24-96h各组细胞的增殖抑制率。3.比较各组细胞p53蛋白的表达水平:用Ad-p53(50MOI)、他莫昔芬(5μmol/l)、Ad-p53(50MOI)与他莫昔芬(5μmol/l)联合作用MCF-7细胞72h，观察各组细胞p53蛋白的表达情况。4.比较各组细胞的凋亡率:用Ad-p53(50MOI)、他莫昔芬(5μmol/l)、Ad-p53(50MOI)与他莫昔芬(5μmol/l)联合作用MCF-7细胞72h，流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双标法检测分析不同处理组MCF-7细胞的凋亡情况。研究结果1. Ad-p53感染MCF-7细胞后，细胞生长缓慢，形态不规则且细胞质均一性差；Ad-p53与他莫昔芬联合作用MCF-7细胞，细胞几乎无增长，细胞出现皱缩、变圆，细胞悬浮现象明显增加。2. Ad-p53感染MCF-7细胞24h-96h后增殖抑制率分别为7.16%±0.39%，25.28%±0.95%，36.86%±0.82%及62.12%±1.01%；Ad-p53与他莫昔芬联合作用MCF-7细胞24h-96h增殖抑制率分别为11.76%±0.86%，39.92%±0.47%，56.92%±0.68%及69.49%±0.56%。3. Ad-p53与他莫昔芬联合作用MCF-7细胞72h，细胞p53蛋白的表达水平明显高于他莫昔芬单药组，与Ad-p53组比较差异不明显。4.流式细胞仪检测细胞的凋亡率，Ad-p53处理MCF-7细胞72h后凋亡率为21.9%；他莫昔芬处理MCF-7细胞72h后凋亡率为17.5%，Ad-p53与他莫昔芬联合作用MCF-7细胞72h后凋亡率为34.7%。研究结论1.重组人p53腺病毒感染乳腺癌MCF-7后，细胞生长缓慢且形态学发生明显改变，且当与他莫昔芬联合使用时细胞生长几乎停止，形态学变化出现时间早且变化更加明显。2.重组人p53腺病毒或他莫昔芬单独作用乳腺癌MCF-7细胞后，MTS法检测细胞的增殖抑制率显著增加；当Ad-p53与他莫昔芬联合作用MCF-7细胞，MCF-7细胞的增殖抑制率在各时期均高于单药组。3.重组人p53腺病毒可诱导乳腺癌MCF-7细胞表达p53蛋白，且p53蛋白的表达水平较对照组及他莫昔芬组增高，与Ad-p53组比较差异不明显。4.重组人p53腺病毒或他莫昔芬单药可诱导乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡，他莫昔芬具有协同Ad-p53诱导细胞凋亡的作用。