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一、目的：本课题以瘦素、瘦素受体为切入点,以自然增龄衰老大鼠为动物模型,以补肾健脾良方——青娥方进行在体干预,观察自然增龄衰老大鼠瘦素、瘦素受体以及睾酮、雌二醇和骨代谢生化指标的表达变化以及之间的关系,旨在从瘦素、瘦素受体角度探讨青娥方调节骨代谢的作用机制,为青娥方临床防治原发性骨质疏松症提供有力的实验依据。二、方法：1实验动物分组与药物干预及取材6月龄健康清洁级SD大鼠雌雄各81只,共162只,进入动物房适应性饲养一周后,雌雄各随机抽取9只,处死取材。其余6月龄SD大鼠144只(雌雄各72只),随机抽取36只(雌雄各18只),雌雄各分为两组,共四组：雌性青娥方组(9只)、雌性生理盐水组(9只)、雄性青娥方组(9只)、雄性生理盐水组(9只)；其余大鼠正常饲养,在9月龄、12月龄、15月龄时再次分组,分组方法同6月龄。雌性和雄性青娥方组：给予青娥方浸膏1.91g/kg/d,以2m1生理盐水溶解后灌服,雌性和雄性生理盐水组：灌服生理盐水2m1/只厌,各月龄大鼠连续干预3个月后处死取材：腹主动脉取血,将血清分装于EP管中,-80℃冻存待测；分离胫骨、腰椎,-80℃冻存待测。2指标检测采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中的LEP、LEP-R、Cbfal、Col Ⅰ、OC、OPG、RANKL、T和E2的含量。胫骨上段常规切片及Masson染色,应用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统进行骨组织形态定量分析,双能X线骨密度仪进行大鼠胫骨的骨密度测定,应用三点弯曲法行胫骨生物力学检测,采用Western blot、Real time PCR检测LEP、LEP-R基因和蛋白的表达水平。三、结果：1随着年龄的增长,雌性和雄性生理盐水组血清LEP-R、E2、T、Cbfa-1、COL-Ⅰ、OC水平和骨组织中LEP、LEP-R的mRNA和蛋白表达水平随增龄而降低,而血清LEP水平随增龄呈上升趋势。6月龄到9月龄雌性和雄性生理盐水组血清OPG、RANKL、 BALP水平随增龄明显升高(P<0.05或P<0.01),9月龄到18月龄显著下降(P<0.05或P<0.01),血清TRACP-5b水平随增龄降低。雄性大鼠BMD在15月龄达到峰值,雌性大鼠BMD在12月龄达到峰值,雌性和雄性生理盐水组BMD和骨小梁面积百分比与同性别6月龄相比显著降低(P<0.01),同月龄相同干预组不同性别间比较雄性BMD和骨小梁面积百分比均比雌性高。雌性生理盐水组胫骨所能承受最大载荷和最大应力均在12月龄达到峰值,18月龄生理盐水组较6月龄具有显著差异(P<0.05),雄性则随增龄持续缓慢降低,无明显差异,同月龄相同干预组不同性别间比较雄性最大载荷和最大应力均比雌性高。2雌性和雄性青娥方组血清LEP、LEP-R、E2、T、OPG、Cbfa-1、COL-Ⅰ、OC、BALP水平和骨组织中LEP、LEP-RmRNA和蛋白表达水平较同月龄同性别生理盐水组均有增加,其中OPG、Cbfa-1各月龄均有显著差异(P<0.05,P<0.01),血清RANKL、 TRACP-5b水平较同月龄同性别生理盐水组降低,无显著差异。雌性和雄性青娥方组BMD、骨小梁面积百分比、最大载荷和最大应力较同月龄同性别生理盐水组显著升高,青娥方组较同月龄同性别生理盐水组骨小梁形态结构完整性较好,数量增多,间距较小,断裂现象少。四、结论：1随着年龄的增长,自然增龄衰老大鼠血清性激素水平下降,血清LEP表达上升,LEP-R表达下降,导致OPG/RANKL比值下降,骨代谢紊乱,骨吸收大于骨形成,从而导致骨质量下降。2青娥方能通过升高自然增龄衰老大鼠性激素水平,增加LEP、LEP-R表达,导致OPG/RANKL比值升高,从而调控骨代谢,改善骨质量,延缓骨骼衰老,发挥防治原发性骨质疏松症的作用。