【摘 要】
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目的:为了探索中药鸦胆子提取物鸦胆子苦醇(brusatol,BRU)对于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制作用及其对肿瘤细胞的凋亡影响,并探究诱导其凋亡可能的分子机制。从获得的实验结果中,探索能在临床上能有效防治三阴性乳腺癌的药物。材料与方法:培养三阴性乳腺癌的MDA-MB-231细胞,经0、5、10、20、40、80μmol/L的BRU作用于MDA-MB-231细胞24小时、48小时
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目的:为了探索中药鸦胆子提取物鸦胆子苦醇(brusatol,BRU)对于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制作用及其对肿瘤细胞的凋亡影响,并探究诱导其凋亡可能的分子机制。从获得的实验结果中,探索能在临床上能有效防治三阴性乳腺癌的药物。材料与方法:培养三阴性乳腺癌的MDA-MB-231细胞,经0、5、10、20、40、80μmol/L的BRU作用于MDA-MB-231细胞24小时、48小时和72小时,应用CCK-8检测试剂盒测定MDA-MB-231细胞的生长抑制率;并用显微镜记录药物作用MDA-MB-231细胞后的细胞形态发生的变化;并且采用流式细胞仪来检测鸦胆子苦醇作用于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞后的凋亡影响。应用蛋白印记方法(Western blot)检测BRU作用于MDA-MB-231细胞后,相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2、cytochrome c、Caspase-3的表达水平。结果:1.CCK-8检测结果显示,鸦胆子苦醇能够显著抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长,最大抑制率达到81.69%,除了在鸦胆子苦醇浓度为40μmol/L和80μmol/L,作用48h和72h后,随着时间或者浓度的增加对细胞的抑制率并没有明显的增加(P>0.05)以外,各组间相比较,在作用时间相同下,不同浓度的鸦胆子苦醇随着给药浓度的提升,对MDA-MB-231细胞的抑制率也呈上升状态,且各浓度组之间比较,存在显著的差异(P<0.05),具有统计学的意义。在给药浓度相同下,随着药物作用时间的延长,MDA-MB-231细胞的抑制率也呈上升状态,且各组之间相比较,存在显著的差异(P<0.05),具有统计学意义。2.经0、5、10、20、40μmol/L BRU作用细胞48小时后,通过显微镜镜下观察,加药之后的细胞形态与未加药的细胞形态相比较,MDA-MB-231细胞形态呈现拉长或树突样等不规则状态,细胞间隙增加、贴壁状态差,悬浮细胞较多等凋亡状态。3.流式细胞仪结果提示,鸦胆子苦醇可以使三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞出现凋亡状态,经0、5、10、20、40μmol/L BRU作用细胞48小时后,BRU的浓度越高,所显示出的细胞凋亡率也越高,且各组间具有明显差异,具有统计学意义(P<0.05)。4.经0、5、10、20、40μmol/L BRU作用细胞48小时后,Western blot方法的检测结果显示,鸦胆子苦醇能诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞出现凋亡,可能是通过激活线粒体内源性相关蛋白来诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡,其中促进凋亡的蛋白Bax和凋亡调控因子cytochrome c以及Caspase 3的表达量呈现明显增加,抑制凋亡的蛋白Bcl-2的表达量呈现下降,并且随着药物作用浓度的增加,相应的变化趋势也增加。且各浓度组之间比较具有显著的差异,具有统计学意义(P<0.05),表明三阴性乳腺癌的MDA-MB-231细胞经鸦胆子苦醇作用后能发生凋亡现象,可能是通过激活线粒体凋亡途径的相关蛋白而发生。结论:根据各项结果显示,鸦胆子苦醇能够明显的抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长,并促使细胞形态发生改变,进而诱导细胞发生凋亡。可能是通过激活线粒体凋亡途径的相关蛋白,使cytochrome c、Bax、Caspase 3蛋白的表达量升高,Bcl-2蛋白的表达量降低,进而加速了细胞凋亡有关。
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