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从腹泻犊牛粪样中分离出一株冠状病毒，该病毒可在HRT-18细胞上形成有规律的病变，对氯仿、乙醚敏感；经1％胰酶处理的病毒仍然能够在HRT-18细胞上生长，毒力保持不变；病毒分别在pH5.0和pH3.0经37℃作用2小时，pH5.0处理组毒力下降1个滴度，pH3.0处理组毒力下降2个滴度；该病毒在50℃时，毒力随时间变化而有不同程度下降，其中，50℃作用15分钟，病毒下降3个滴度；50℃作用30分钟，CPE消失；恒定时间1小时，设定50℃、60℃、70℃和80℃不同温度处理后的病毒失去增殖能力。病毒仅对HRT-18细胞敏感。提取病毒RNA后，用BcV引物RT-PCR扩增出1420bp和322bp片断，基因测序结果与USA(AF058942)株的同源性为100％，确定分离的病毒为牛冠状病毒(命名为BCV-DO)。将RT-PCR扩增出的BCV N蛋白基因与pGEM-T Easy载体连接构建BCV N蛋白克隆质粒(pGEM-T-N)，将阳性克隆质粒经BamHI与Sal I双酶切后，回收目的片段并插入到pET-32a(+)表达载体中，构建成重组质粒(pET-32a-N)，转化到Ecoli BL-21后，在37℃下，经IPTG诱导表达。用表达的重组N蛋白和分离的BCV分别免疫小鼠，用它们的抗血清分别与重组N蛋白进行Western blot。结果重组蛋白能够与重组蛋白抗血清和分离的BCV抗血清结合，表明重组蛋白能够刺激小鼠产生抗体，具有与天然BCVN蛋白相同的抗原性。