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目的：
了解我国15群15株问号钩端螺旋体(简称问号钩体)参考标准株和双曲钩体国际参考标准株PatocⅠ株携带ompA基因情况，构建该基因的原核表达系统E. coli BL21DE3pET42a-ompA，重组表达OmpA(rOmpA)并鉴定rOmpA的免疫原性和免疫保护性。
方法：
1、采用常规酚-氯仿法提取16株钩端螺旋体的基因组DNA，PCR扩增全长ompA基因，T-A克隆后测序。
2、构建问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601株ompA基因的原核表达系统E. coli BL21DE3pET42a-ompA，并采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图象分析系统检测rOmpA表达情况及其产量。
3、rOmpA免疫家兔以获得抗血清，采用免疫双扩散试验检测抗血清的效价。采用Western Blot检测rOmpA与其抗血清和问号钩体56601株全菌抗血清的免疫反应性，显微镜凝集试验(MAT)检测rOmpA抗血清对15株问号钩体的交叉凝集情况。
4、分别用问号钩体黏附小鼠单核-巨噬样细胞株J774A.1细胞模型和豚鼠感染模型了解rOmpA兔抗血清黏附阻断及rOmpA的免疫保护作用。
结果：
1、15株问号钩体参考标准株均含有序列保守的ompA基因，与已报道的问号钩体黄疸出血群赖型赖株ompA基因比较，其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.4％～99.9％和98.4％～99.7％，而双曲钩体PatocⅠ株则不含ompA基因。
2、所构建的原核表达系统其rOmpA表达量约占细菌总蛋白的20％。
3、rOmpA能诱导家兔产生抗体，其抗血清免疫扩散效价为1：4。兔抗血清及问号钩体56601株全菌抗血清均能与rOmpA产生阳性Western杂交信号。rOmpA抗血清对15株问号钩体的MAT效价为1：20～1：320。
4、粘附阻断试验显示1：10～1：160稀释的rOmpA抗血清均能阻断问号钩体黏附J774A.1细胞，而豚鼠保护试验结果显示100μg和200μg rOmpA对豚鼠的免疫保护率分别为50.0％和75.0％。
结论：
ompA基因仅存在于不同血清群致病性问号钩体基因组中。rOmpA具有较好的抗原性、交叉免疫反应性以及一定的免疫保护作用，有可能作为通用型问号钩体基因工程疫苗的侯选抗原。