论文部分内容阅读
胆囊收缩素-B／胃泌素(Cholecystokinin-B／gastrin，CCK-B)受体属七次跨膜G蛋白偶联受体超家族，主要介导胃泌素的正常生理和病理功能，与胃泌素组成胃泌素／CCK-B受体自分泌环在胃癌的发生发展中起重要作用。 本研究首先用RT-PCR及测序方法检测了30例人类胃癌组织及癌周正常胃粘膜、10例胃炎、2例尸检胃组织及胃癌细胞株SGC-7901中CCK-B受体、CCK-B受体的异位剪接变异体(intron 4-contained variant of cholecystokinin B receptor，CCKBRi4sv)及胃泌素基因的表达。结果显示，正常、炎症和恶性胃组织同时表达正常和异位剪接的CCK-B受体基因，且两种受体基因的表达量与胃癌的分化和转移无关。有73.3％(22／30)的胃癌组织及SGC-7901细胞表达胃泌素基因，其表达与胃癌的转移密切相关(P＜0.05)。因此我们推测：1．人类胃癌及SGC-7901细胞中存在胃泌素／CCK-B受体自分泌环，可能在胃癌的进程中起重要作用；2．异位剪接变异型CCK-B受体—CCKBRi4sv在正常胃上皮细胞中以目前尚不清楚的功能发挥作用。 其次，为了证实我们的推测，本研究分别从胃泌素和CCK-B受体两个侧面阻断自分泌环，观察阻断该环后对胃癌细胞株SGC-7901细胞生长特性的影响。包括：(一)用RT-PCR、免疫细胞化学和放射四川大学博士学位论文中文摘要免疫测定法证实，SGC一7901细胞不仅复合表达CCK一B受体和胃泌素基因，也同时表达胃泌素蛋白，加入胃泌素抗体后，用MTT法，流式细胞术和Westem blot检测，发现阻断胃泌素后能以浓度依赖的方式降低SGC一7901细胞的生长率、S期细胞的百分率以及细胞的增殖指数，使核增殖相关抗原Ki67的表达量降低。且随着抗体浓度的增加，SGC一7901细胞中凋亡细胞的百分率和凋亡相关蛋白Caspase一3的表达量逐渐增加，而转移相关蛋白MMP一2的表达量逐渐降低。这些实验证明，打断胃泌素/C CK一B受体自分泌环后，能促进SGC一7901细胞的凋亡，抑制细胞的增殖和转移。 (二)本研究用pCR$lJ备小干扰RNA(small inter化renee RNA，siRNA)表达框的RNA干扰(RNAi)技术，构建了一条对照siRNA(无关基因)和两条靶向CCK一B受体mRNA的siRNA表达框，脂质体转染SGC一7901细胞，筛选siRNA并利用siRNA的瞬时表达初步研究了CCK一B受体基因的下调对结果发现制率约为 筛选的siRNASGC一7901细胞的增殖、凋亡和转移的影响。转染可以抑制CCK一B受体基因的表达，抑50%。下调CCK一B受体基因的表达，可以抑制SGC一7901细胞的生长率，降低S期细胞的百分率和增殖指数，使核增殖相关抗原Ki67和转移相关蛋白MMP一2的表达量下降，但对SGC一7901细胞的凋亡和调亡相关蛋白Caspase一3的表达无影响。从而证实下调CCK一B受体基因的表达，阻断胃泌素/CCK一B受体自分泌环后，也能抑制SGC一7901细胞的增殖和转移。 总结以上，本研究首次证明CCKBRi4sv这一新的CCK一B受体亚型在正常、炎性和恶性胃组织中表达，并为胃泌素/CCK一B受体自分泌途径在胃癌中的作用提供了直接的实验依据。同时也可为胃癌的药物治疗和内分泌治疗提供新的靶点及胃癌RNAi的基因治疗奠定初步企四川大学博士学位论文中文摘要的实验基础。关键词:胃泌素，胆囊收缩素一B，CCKBRi4sv，胃癌，细胞增殖和凋亡，RNA干扰，siRNA，Ki67，Caspase一3，MMP一2亡