大鼠脑挫伤后脑组织β-APP、MAP-2的时序性表达

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目的:应用免疫组化SABC法、Western blot免疫印迹法及实时荧光定量RT-PCR技术检测实验性大鼠脑挫伤后脑组织中β-APP和MAP-2的表达变化规律,以期为法医学实践中大致推断颅脑损伤时间提供科学的参考依据。方法:采用Feeney s法建立大鼠脑挫伤模型。选取64只健康成年SD大鼠,雌雄不限,体重250±10g(由山西医科大学实验动物中心提供),随机分为实验组(n=56)及对照组(n=8),实验组依据损伤时间不同再分为7个亚组。均实施麻醉后,实验组大鼠采用自由落体打击法于颅骨中线旁3mm处造成脑挫伤模型,通过常规HE染色认定损伤部位及损伤程度,对大鼠脑挫伤后14d内继发性脑损伤的病理学改变、β-APP和MAP-2的分布特征进行光镜观察,同时分别于损伤后1h、4h、12h、48h、72h、7d、14d七个时间点(每个时间点8只)取挫伤处脑组织各100mg,置于液氮中保存备用;对照组大鼠未打击造伤,其余处理与实验组相同。应用免疫组化SABC法、免疫印迹Western blot法从蛋白水平观察脑挫伤后β-APP、MAP-2的时序性变化,结合图像分析技术及统计学分析进行结果分析;应用实时荧光定量RT-PCR技术并结合图像分析技术从核酸水平定量半检测实验组及对照组动物的各脑组织β-APP、MAP-2mRNA的时序性变化,观察上述指标与损伤时间的关系。结果:三种方法统计结果显示:(1)大鼠脑挫伤后β-APP在脑组织中的表达于伤后12h达到峰值,随后阳性反应细胞逐渐减少,7d后仍有少量表达但仍高于对照组,14d后表达基本恢复至接近对照组水平;(2) MAP-2于脑挫伤后1h表达明显丢失,4h后蛋白丢失达到高峰,12h蛋白开始部分恢复表达,48h蛋白量逐渐增多,14d蛋白表达达到高峰。结论:大鼠脑挫伤后脑组织中β-APP和MAP-2表达随着损伤时间呈规律性变化,有望用于法医学鉴定及早期法医学损伤时间推断。免疫组化技术操作简单且易行,实时荧光定量RT-PCR技术检测分子水平的变化敏感而且精确,适合法医学研究及检案的需要。
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